丁基苯酞对H2O2诱导下视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用

• 作者: 东莉洁 张哲 李筱荣 王琼 邢小丽 黄亮瑜 黄欣远
• 来源期刊: 中华眼底病杂志
• 关键词: 视网膜色素上皮 细胞凋亡 丁基苯酞 氧化应激
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 480-487
• 页数: 8页
• 字数: 5704字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2019.05.011

摘要

目的 观察丁基苯酞(NBP)对H2O2诱导下RPE细胞凋亡的保护作用.方法 以人ARPE-19细胞系为实验细胞,并将其分为对照组、模型组及NBP组.对照组单纯采用完全培养基培养细胞.模型组采用200μmol/L的H2O2刺激细胞2 h,换液后给予完全培养基培养细胞.NBP组采用200μmol/L的H2O2及1μmol/L的NBP共同培养细胞2 h,换液后给予完全培养基联合1μmol/L的NBP继续培养细胞.采用MTT法检测细胞受到氧化应激刺激后的细胞活力;HE染色对RPE细胞形态进行观察;Hoechst33258染色观察RPE细胞凋亡形态;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)观察细胞膜电位改变及细胞早期凋亡变化;2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色观察细胞内ROS生成堆积情况;细胞免疫荧光和Western blot分析NBP对血红素氧合酶1(HO-1)表达的影响.结果 MTT法检测结果显示,细胞培养24、48 h,对照组(t=17.710、13.760,P<0.0001、<0.0001)、NBP组(t=4.857、9.225,P=0.0007、P<0.0001)细胞生存力均较模型组更强,差异均有统计学意义.HE染色及Hoechst33258染色观察发现,与对照组比较,模型组细胞数量明显变少,细胞形态不完整;与模型组比较,NBP组细胞数量明显增多,细胞形态更好.JC-1法检测结果显示,模型组凋亡细胞数较对照组明显增多,NBP组凋亡细胞数较模型组明显减少.DCFH-DA染色观察发现,模型组细胞内ROS堆积较对照组更多,NBP组细胞内ROS堆积较模型组更少.免疫染色观察发现,NBP组细胞的HO-1荧光强度较对照组明显增高,差异有统计学意义(t=10.270,P=0.0005).Western blot检测结果显示,NBP以时间依赖性的方式上调HO-1的表达水平;NBP作用4、8、12 h时HO-1相对表达量较0 h时呈明确升高趋势,差异有统计学意义(F=164.91,P<0.05).结论 氧化应激损伤可下调RPE细胞的生存力并诱导其出现凋亡,NBP通过上调HO-1的表达,有效提高RPE细胞抗氧化能力,减轻细胞损伤并抑制细胞凋亡.