载 BDNF 基因 PEG-PLGA 纳米微球的制备及其转染外源性神经干细胞的研究

• 作者: 余勇波 唐健 张桂龙 朱治翰 杨芳 陈陆馗
• 来源期刊: 临床神经外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 纳米微球 神经干细胞 基因治疗 转染
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 转化医学专题
• 页码范围: 109-114
• 页数: 6页
• 分类号: RQ78|Q291
• 字数: 5458字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-7770.2019.02.004

摘要

目的 构建转染后能表达神经修复功能蛋白的载脑源性神经营养因子( brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因的聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸纳米微球[ poly ( ethylene glycol )-poly ( lactin-co-glycolic acid)-BDNF-nanoparticles,PEG-PLGA-BDNF-NPs];探讨其转染外源性神经干细胞( neural stem cells, NSCs)后对细胞生物学功能的影响.方法 采用W／O／W复乳溶剂挥发法制备装载BDNF基因质粒的PEG-PLGA纳米微球转染复合体.用扫描电镜和透射电镜表征纳米微球的形貌,粒度电位分析仪测量纳米微球的粒径及Zeta电位.测定纳米微球对BDNF基因质粒的包封率和载药量;检测PEG-PLGA纳米微球转染复合体的体外缓释质粒的情况.倒置显微镜观察纳米微球转染复合体对NSCs形态的影响;并用CCK-8法检测其对NSCs增殖的影响.荧光倒置显微镜观察NSCs胞吞纳米微球转染复合体后的分泌作用;Western-blot及RT-PCR检测其BDNF的分泌能力.结果 (1)制备了包载BDNF基因的PEG-PLGA纳米微球,微球的粒径约为200 nm,粒径均一;包封率及载药量均较高,具有一定的缓释效果. (2)分离培养出了具有不断增殖能力,表达神经巢蛋白的NSCs;并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞. (3)载BDNF基因的PEG-PLGA纳米微球高效转染NSCs,且转染不会引起显著细胞毒性;Western-blot及RT-PCR检测显示其大量表达BDNF.结论采用W／O／W复乳溶剂挥发法制备得到安全高效的PEG-PLGA-BDNF纳米微球.并首次构建了装载PEG-PLGA-BDNF-NPs,能表达具有神经修复功能的BDNF的外源性NSCs系.