摘要:
目的 探究miR-29a在H2O2诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤中的作用和机制.方法 使用不同浓度(0 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、300 μmol·L-1、400 μmol·L-1)的H2O2处理人晶状体上皮细胞HLE-B3,以确定后续实验中H2O2使用的浓度.将HLE-B3细胞随机分成4组:对照组、H2O2组、H2O2+模拟物对照组和H2O2+ miR-29a模拟物组,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,Real-time PCR检测miR-29a和Bcl2修饰因子(Bcl2 modifying factor,BMF)、Bcl2拮抗/杀伤因子1(Bcl2-antagonist/killer 1,BAK1)mRNA表达,Western blotting检测BMF和BAK1蛋白表达.结果 HLE-B3细胞活力随着H2 O2浓度的增加而降低,呈现剂量依赖性,后续实验H2O2浓度选择200 μmol·L-1.与对照组相比,H2O2组中miR-29a的表达(0.56±0.12)下调,细胞活力[(59.67±10.09)%]和SOD含量[(52.97±6.64)U·mL-1]降低,细胞凋亡率[(40.30±4.76)%]和ROS水平[(299.52±43.95)%]增加,BMF和BAK1 mRNA和蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(均为P<0.05).与H2O2组相比,H2O2+ miR-29a模拟物组中miR-29a的表达(4.49±0.55)上调,细胞活力[(92.83±8.09)%]和SOD含量[(84.03 ±6.31)U·mL-1]增加,细胞凋亡率[(18.74±2.48)%]和ROS水平[(143.13±21.32)%]降低,BMF和BAK1mRNA和蛋白表达均下调,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与H2O2组相比,H2O2+模拟物对照组上述指标变化均不大,差异均无统计学意义(均为P>0.05).结论 上调miR-29a可促进H2O2诱导的人晶状体上皮细胞的细胞增殖、抑制细胞凋亡、减少氧化损伤,这些作用可能与BMF和BAK1的表达下调相关.