miR-34a对葡萄膜黑色素瘤细胞生物学行为的抑制作用及其机制

• 作者: 张珂 朱豫 王丽丽 王婧
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 微小RNA 葡萄膜黑色素瘤 侵袭 迁移 小眼畸形相关转录因子 miR-34a
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 326-331
• 页数: 6页
• 字数: 4924字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2019.05.002

摘要

目的 研究微小RNA-34a(miR-34a)对葡萄膜黑色素瘤细胞生物学行为的影响及其机制.方法 采用葡萄膜黑色素瘤M23细胞作为研究对象,在细胞中分别转染miR-34a mimics和mimics阴性对照,分别记作miR-34a转染组和阴性对照组,设置不转染的细胞为正常对照组.采用real-time PCR法检测转染后miR-34a过表达效果,MTT法检测细胞增生情况,Transwell小室试验检测细胞侵袭和迁移.靶基因预测库预测miR-34a的靶基因,荧光素酶报告载体鉴定靶基因,real-time PCR和Western blot法检测靶基因的mRNA和蛋白表达.在M23细胞中共转染miR-34a mimics和小眼畸形相关转录因子(MITF)过表达载体,采用MTT法和Transwell小室试验分别检测细胞增生、侵袭和迁移能力变化,real-time PCR和Western blot法检测MITFmRNA和蛋白表达. 结果 转染miR-34a mimics后的M23细胞中miR-34a表达水平升高.正常对照组、阴性对照组和miR-34a转染组间细胞增生值、侵袭细胞数目和迁移细胞数目总体比较,差异均有统计学意义(F=18.000,P=0.003;F=20.345,P=0.002;F=15.717,P=0.004),其中miR-34a转染组较正常对照组、阴性对照组细胞增生值减小,侵袭细胞数目和迁移细胞数目减少,差异均有统计学意义(均P＜0.05).靶基因预测库及荧光素酶活性报告基因载体显示,MITF为miR-34a的靶基因.miR-34a转染组MITF mRNA和MITF蛋白的相对表达量分别为0.45±0.06和0.36±0.04,阴性对照组分别为0.99±0.11和0.62±0.05,正常对照组分别为1.00±0.07和0.63±0.08,miR-34a转染组MITF mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).miR-34a+MITF组细胞增生值(A570)、侵袭细胞数目和迁移细胞数目分别为0.35±0.02、(29.48±3.20)个和(41.87±5.82)个,明显高于miR-34a+Vector组的0.26±0.03、(18.53±1.47)个和(27.64±2.45)个,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miR-34a具有抑制葡萄膜黑色素瘤细胞恶性表型的作用,其作用机制与抑制靶基因MITF的表达有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱豫	郑州大学第一附属医院眼科	109	636	14.0	20.0
2	张珂	郑州大学第一附属医院眼科	50	182	7.0	12.0
3	王丽丽	郑州大学第一附属医院眼科	23	107	6.0	10.0
4	王婧	郑州大学第一附属医院眼科	9	14	2.0	3.0