慢病毒介导HIF-1α沉默对缺氧肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

• 作者: 刘丽璇 吴灵飞 李国平 胡敏敏 蒲泽锦 黄聪武
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 shRNA RNA干扰 HepG2细胞 HIF-1α
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 27-32,104
• 页数: 7页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.14188/j.1671-8852.2018.0620

摘要

目的:构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,观察慢病毒介导的HIF-1α基因沉默对体外模拟缺氧条件下的肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其机制.方法:设计合成1条针对HIF-1α基因的shRNA干扰序列,构建于慢病毒载体质粒GV248中,转染293T细胞包装产生慢病毒,转染人肝癌细胞株HepG2细胞,嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株.将HepG2细胞分为正常对照组、干扰对照组(转染NC-shRNA)、干扰组(转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150 μmol/L CoCl2)模拟肿瘤细胞缺氧微环境,应用Western Blot检测HepG2细胞中HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,CCK-8检测沉默HIF-1α基因对HepG2细胞增殖的影响,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测沉默HIF-1α基因对细胞凋亡的影响.Western Blot检测HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质细胞色素C(Cyt-C)表达的变化.结果:①成功构建HIF 1α-shRNA慢病毒载体并转染HepG2细胞,缺氧培养细胞24 h后,与正常对照组及干扰对照组相比,干扰组细胞内HIF-1α蛋白表达明显降低(P＜0.01),证实慢病毒载体能够有效沉默HIF-1α基因.②沉默HIF-1α基因后缺氧培养的HepG2细胞增殖率下降(P＜0.05),而细胞凋亡比例升高(P＜0.01).③Western Blot结果显示,与正常对照组及干扰对照组相比,沉默HIF-1a基因后细胞内凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质Cyt-C表达上调(P＜0.05或P＜0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P＜0.01),Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高.结论:通过shRNA慢病毒载体途径可有效沉默缺氧HepG2肝癌细胞HIF-1α基因,HIF-1α沉默能显著抑制缺氧HepG2细胞增殖活性,促进细胞凋亡,其凋亡途径可能与激活内源性线粒体凋亡通路有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴灵飞	汕头大学医学院第二附属医院消化内科	59	322	9.0	15.0
2	蒲泽锦	汕头大学医学院第二附属医院消化内科	24	146	7.0	10.0
3	李国平	汕头大学医学院第二附属医院消化内科	41	230	9.0	13.0
4	黄聪武	汕头大学医学院第二附属医院消化内科	16	136	6.0	11.0
5	胡敏敏	汕头大学医学院第二附属医院消化内科	2	2	1.0	1.0
6	刘丽璇	汕头大学医学院第二附属医院消化内科	2	2	1.0	1.0