恒河猴和食蟹猴ABO血型竞争性等位基因PCR(KASP)检测方法的建立

• 作者: 杨玲焰 王立鹏 荣荣
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 食蟹猴 恒河猴 ABO血型 竞争性等位基因PCR
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 31-36
• 页数: 6页
• 分类号: R-33
• 字数: 4757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2019.08.005

摘要

目的 人的ABO血型常规免疫学检测方法不适用于实验猴猕猴血型检测,而实验猴血型鉴定在器官移植等研究中必不可少.本研究目的是建立一个快速、可靠的恒河猴与食蟹猴ABO血型核酸鉴定方法.方法 本室建立了一种新的ABO血型的分子学检测方法,利用竞争性等位基因PCR(KASP)技术,通过识别与血型密切相关功能基因的2个SNP位点上的碱基,对恒河猴与食蟹猴血型进行分型,并通过设计2个SNP位点外围的普通PCR引物,对KASP方法鉴定出的血型样本进行Sanger测序鉴定.结果 比对了15份用Taqman PCR方法已确定血型的食蟹猴全血核酸样本,新建立的KASP分型结果与原血型结果完全一致,为了保证KASP方法鉴定结果的准确性,实验人员用新建立的普通PCR方法通过Sanger测序验证了KASP方法与测序结果完全一致.为了对新建的KASP方法重复性进行验证,选取了已知血型的6份实验猴全血,每份血样做5个重复,结果显示该方法有极好的重复性.进一步用新建的KASP方法检测了51份临床样本,其中食蟹猴样本38份,恒河猴样本13份,同一样本的2个位点的血型结果完全一致,其中A型血9份(17.6％),B型血19份(37.3％),AB型血23份(45.1％),未检出O型血.同时从A型、B型、AB型的临床样本中,各型分别选了5个样本,进行普通PCR扩增及测序分析,证明2个SNP位点上的序列与KASP分型结果一致.结论 新建的KASP血型鉴定方法准确性高,可用于实验恒河猴与食蟹猴的ABO血型的快速检测.该方法相较于传统的血清学或测序方法,简单快捷,经济可靠,结果易于判读,同时对样本的要求比传统的血清学方法低,新鲜或存放较久的全血、唾液或核酸等都可以用于检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王立鹏		3	3	1.0	1.0
2	杨玲焰		2	1	1.0	1.0
3	荣荣		1	1	1.0	1.0