水痘—带状疱疹病毒糖蛋白gE在昆虫细胞中的表达鉴定及其晶体培养

• 作者: 夏宁邵 姚巧缤 张玉云 朱瑞 李婷婷 李少伟 李泽凯 李瑾瑾 程通 荣芮 薛文辉 顾颖
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白gE 杆状病毒-昆虫表达系统 晶体培养 硒代甲硫氨酸
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 505-510
• 页数: 6页
• 分类号: R373.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.190503

摘要

目的 利用杆状病毒—昆虫表达系统建立纯化水痘带状疱疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,筛选gE蛋白的晶体培养条件,以期用于结构解析. 方法 将VZV糖蛋白gE基因序列克隆至杆状表达载体pAcgp67B载体中,利用High FiveTM昆虫细胞表达gE蛋白并进行TALON亲和层析纯化;利用WAVE生物波浪反应器建立含硒代甲硫氨酸的gE蛋白方法,以便在晶体结构解析中利用单波长或多波长异常散射进行相位解析;通过分子排阻色谱、分析超离,差示扫描量热法和酶联免疫吸附试验等分析gE蛋白的理化性质;利用结晶试剂盒对gE498和gE354蛋白的结晶条件进行初筛. 结果 获得的gE498和gE354蛋白纯度约为90％、产量为8～10 mg/L.理化分析显示两种gE蛋白在溶液中主要以均一稳定的单体形式存在,并呈现出良好的反应原性.在gE354晶体初筛中获得3个结晶条件:CrystalH3、PEGH12和IndexB10. 结论 建立了VZV糖蛋白gE表达和纯化方法,制备的蛋白纯度高,且具有反应原性,并筛选出CrystalH3、PEGH12和IndexB10这3个结晶条件,为gE糖蛋白的结构与功能研究及新型疫苗开发奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏宁邵		87	628	14.0	23.0
2	李少伟		23	99	4.0	9.0
3	程通		12	32	4.0	5.0
4	顾颖		8	17	3.0	4.0
5	李婷婷		2	0	0.0	0.0
6	张玉云		2	0	0.0	0.0
7	姚巧缤		1	0	0.0	0.0
8	荣芮		1	0	0.0	0.0
9	李泽凯		1	0	0.0	0.0
10	薛文辉		1	0	0.0	0.0
11	李瑾瑾		1	0	0.0	0.0
12	朱瑞		1	0	0.0	0.0