水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E胞外域基因的真核细胞稳定表达及其免疫反应性的初步研究

• 作者: 伊兴旭 王明丽 甘霖 陈敬贤
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白E 转染 真核稳定表达 血清学试验
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 259-263,264
• 页数: 6页
• 分类号: R373.1|R392.7
• 字数: 5044字
• 语种: 中文

摘要

目的：真核细胞稳定表达水痘-带状疱疹病毒( VZV)糖蛋白E( gE)的胞外域基因,应用gE抗原建立VZV感染的血清学试验来评价VZV疫苗的免疫效果。方法构建含有VZV gE胞外域基因的真核表达质粒pCDNA3．1-gE,测序后脂质体转染 COS-7细胞,经 G418筛选出稳定表达VZV gE的细胞株。采用RT-PCR法检测VZV gE的mRNA, Western blot和间接免疫荧光法检测gE的免疫反应性,表达产物经Ni2+-NTA柱纯化后包被ELISA板,对127份0~10岁正常儿童血清中VZV-IgG抗体水平进行检测。结果成功筛选出能够稳定表达VZV gE胞外域基因的COS-7细胞株,RT-PCR检测到gE的mRNA,经Western blot和间接免疫荧光鉴定,gE具有明显的免疫反应性,COS-7细胞株和其培养上清液中均有gE融合蛋白,表达量约为0．632 mg/ml,纯度约为90%。 ELISA实验检测了127份0~10岁儿童血清中VZV-IgG抗体,总阳性率为81．89%,特异度和灵敏度分别为93．75%和88．24%。结论本实验获得稳定高效表达VZV gE胞外域基因的COS-7细胞株,建立的ELISA 血清学检测方法有助于 VZV感染的流行病学研究和对易感人群VZV感染的诊断和预防。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王明丽	安徽医科大学微生物学教研室	174	907	13.0	19.0
2	甘霖	安徽医科大学微生物学教研室	17	99	6.0	8.0
3	伊兴旭	安徽医科大学微生物学教研室	3	19	2.0	3.0