VZV糖蛋白E基因胞外域的原核表达及其兔抗血清的制备

• 作者: 伊兴旭 王明丽 甘霖 陈敬贤
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 水痘-带状疱疹病毒 原核表达 融合蛋白 兔抗血清
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 151-155
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1|R392.7
• 字数: 4393字
• 语种: 中文

摘要

目的 采用原核表达系统表达水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE)基因的胞外域,将纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,制备该蛋白特异性抗血清.方法 构建原核表达质粒gE-pET-32a(+),测序后将其转化至E.coliBL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,获得VZVgE融合蛋白.采用SDS-PAGE电泳、Western blot法鉴定其特异性,利用Ni2+-NTA柱对gE蛋白进行纯化,复性后免疫新西兰家兔,获得兔抗VZV gE血清;采用间接免疫荧光、Western blot法和ELISA法检测该血清的特异性和效价.结果 成功诱导表达出VZV gE融合蛋白,SDS-PAGE鉴定提示其主要为包涵体表达,浓度约为3.01mg/ml.蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,纯度约为90％.Western blot法显示,经变性、复性后的该融合蛋白有良好的免疫反应性.用该蛋白免疫新西兰家兔后获得兔抗VZV gE血清.ELISA分析显示,该兔抗血清的效价为1∶6400.结论 成功构建了高效表达VZV gE蛋白的原核表达系统,获得较高纯度的gE蛋白,可以作为VZV亚单位疫苗的候选抗原,制备了特异性及效价均较高的兔抗VZV gE多克隆抗体,为VZV感染的临床诊断及治疗提供了重要的实验工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈敬贤	安徽医科大学微生物学教研室	15	72	5.0	7.0
2	王明丽	安徽医科大学微生物学教研室	174	907	13.0	19.0
3	甘霖	安徽医科大学微生物学教研室	17	99	6.0	8.0
4	伊兴旭	安徽医科大学附属巢湖医院检验科	3	19	2.0	3.0