鸡催乳素受体胞外域的分子克隆及原核表达

• 作者: 刘志 刘颖 施振旦 李孝伟 黎敏义
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡催乳素受体基因 胞外域 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 动物科学与兽医学
• 页码范围: 73-77
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4514字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-411X.2006.04.019

摘要

根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列(GenBank号:D13154)设计并合成1对覆盖编码区58～1 249位核苷酸的引物,以家鸡垂体总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得了特异性片断,将该片断克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌E.coli DH5α永久保存.通过设计第2对引物扩增PRLR胞外域cDNA片段,该片段经酶切后克隆到表达载体pRSET A的EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ两酶切位点之间,构建重组质粒pR-PRLR.该质粒在转化感受态细菌E.coli BL21(DE3)后,在IPTG诱导下促使重组菌表达了相对分子质量为53 640左右的重组融合蛋白,表达量在0.1 mmol/L IPTG诱导5 h时达到最高,约占总菌体蛋白的17.6%左右.表达产物可经体积分数为50%的Ni-NTA凝胶纯化,说明重组蛋白中具有正确的His-tag标签及之后的鸡催乳素受体编码区胞外域序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施振旦	华南农业大学动物科学学院	76	873	18.0	24.0
2	李孝伟	华南农业大学动物科学学院	9	80	4.0	8.0
3	刘颖	华南农业大学动物科学学院	42	207	8.0	12.0
4	黎敏义	华南农业大学动物科学学院	5	30	4.0	5.0
5	刘志	华南农业大学动物科学学院	4	57	3.0	4.0