根癌农杆菌介导观赏羽衣甘蓝遗传转化体系优化

• 作者: 付小蕾 毛洪玉 王欢 祝朋芳
• 来源期刊: 沈阳农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 根癌农杆菌 羽衣甘蓝 遗传转化 外植体
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 543-549
• 页数: 7页
• 分类号: S635.9
• 字数: 5808字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1700.2019.05.005

摘要

为建立稳定的羽衣甘蓝遗传转化体系,以羽衣甘蓝自交系'Mark 10','W02-7'和'Curly 6'为试材,通过单因子试验,比较羽衣甘蓝子叶、子叶柄、子叶片、下胚轴4种外植体的再生能力,筛选培养基中的适宜激素浓度,优化了羽衣甘蓝不同外植体的再生体系.将播种后6d的子叶于最适再生培养基上进行黑暗预培养,以根瘤农杆菌为介导侵染子叶后,于黑暗条件下进行农杆菌与植物材料的共培养.随后转入含有头孢霉素的抑菌培养基中进行抑菌培养,再将子叶移入含有卡那霉素浓度的筛选培养基中进行抗性芽选择,并提取植物基因组DNA进行目的基因的PCR验证,从而建立高效的羽衣甘蓝遗传转化体系.结果表明:最佳的外植体是羽衣甘蓝的子叶,在培养基MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1上,不定芽分化率可达100％;子叶经2～3d预培养,将OD600值为0.3～0.5的携带DFR基因表达载体的农杆菌菌液离心,以50mL MS重悬液重悬,侵染外植体5min,共培养2d;采用头孢霉素300mg·L-1,抑菌培养3d后,采用10mg·L-1卡那霉素进行抗性芽选择.在播种后30～40d共获得了24个抗性芽,以抗性芽的基因组DNA为模板进行PCR扩增,9株呈DFR阳性,显示外源基因已经成功整合到羽衣甘蓝基因组中,平均转化率为37.5％.本研究结果可以为羽衣甘蓝重要性状基因的遗传转化提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毛洪玉	沈阳农业大学林学院	48	510	13.0	21.0
2	王欢	沈阳农业大学林学院	29	132	6.0	10.0
3	祝朋芳	沈阳农业大学林学院	53	425	13.0	17.0
4	付小蕾	沈阳农业大学林学院	1	0	0.0	0.0