双酶联合消化法培养人皮肤成纤维细胞

• 作者: 刘全忠 刘原君 孔杰 王敬 范丽云 韩珑 齐蔓莉
• 来源期刊: 中国皮肤性病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 皮肤 成纤维细胞 原代培养 酶消化法
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 772-775
• 页数: 4页
• 分类号: R751
• 语种: 中文
• DOI: 10.13735/j.cjdv.1001-7089.201812083

摘要

目的 建立一种便捷、高效的人皮肤成纤维细胞体外培养技术,获得大量高纯度原代细胞.方法 取健康成年男性包皮标本,去除皮下组织,将皮肤剪成小皮片,以0.25％的胰蛋白酶溶液4℃消化过夜后分离去除表皮;将真皮组织剪碎,加入0.1％胶原酶Ⅱ溶液后于37℃CO2孵育箱中消化3～4h,筛网过滤,收集滤液后离心、培养.绘制细胞生长曲线,HE染色观察细胞形态,细胞免疫荧光、Westernblot检测Vimentin鉴定成纤维细胞,取第3代、第6代细胞以流式细胞术检测细胞纯度.结果 获得原代人皮肤成纤维细胞;细胞生长周期:0～2 d为潜伏期,2～5d为指数生长期,之后进入平台期;细胞为梭形或星形;Vimentin表达呈阳性,鉴定为成纤维细胞;第3代、第6代成纤维细胞纯度分别为95.82％、99.51％.结论 利用双酶联合消化法成功培养高纯度原代人皮肤成纤维细胞,为进一步研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘原君		65	208	7.0	9.0
2	刘全忠		170	703	11.0	17.0
3	范丽云		6	14	2.0	3.0
4	齐蔓莉		45	177	7.0	10.0
5	王敬		13	41	5.0	5.0
6	孔杰		8	15	3.0	3.0
7	韩珑		4	5	1.0	2.0