摘要:
目的 探讨脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)在抑制博来霉素诱导裸鼠皮肤纤维化方面的作用及机制.方法 选用5~6周龄雌性BALB/c裸鼠24只,完全随机分为空白对照组、移植对照组、模型组和移植组4组,每组6只.空白对照组:每天于裸鼠背部皮下注射PBS溶液2次,每次1 ml,间隔1h注射第2次.移植对照组:先注射1×106/ml ADSCs1 ml,间隔1h再注射1 ml PBS溶液.模型组:先注射1 mg/ml博来霉素1 ml,间隔1h再注射1 mlPBS.移植组:先注射1 ml博莱霉素,间隔1h再注射1 ml ADSCs.注射4周后取材,大体观察各组裸鼠皮肤质地;蛋白质印迹法检测纤维化相关蛋白的表达;RT-PCR检测与纤维化形成相关基因的表达;免疫组织化学法检测皮肤纤维化程度指标α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达.实验数据以Graphpad 7.0软件进行分析,2组间比较采用t检验,多组样本均数比较应用One-Way ANOVA,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 蛋白质印迹法实验结果示,TGF-β1、Notch1及α-SMA表达在ADSCs移植组较模型组明显降低,而空白对照组与移植对照组比较无明显差别.Real-time PCR检测结果:模型组中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Notch1、Smad3表达量分别为0.90±0.11、1.20±0.05、1.00±0.06和0.90±0.05,ADSC移植组中分别为0.43±0.05、0.63±0.04、0.60±0.05和0.20±0.11,比模型组明显降低,差异有统计学意义(t=5.29、8.05、5.50、13.44,P=0.006、0.001、0.005、0.000).空白对照组、移植对照组、模型组和移植组皮肤组织中α-SMA mRNA表达分别为0.37±0.01、0.35±0.05、1.43±0.10、0.83±0.03,与空白对照组及移植对照组相比,模型组α-SMA表达量明显升高,差异有统计学意义(F=352.3,P=0.000),而ADSCs移植组相对模型组α-SMA表达量明显下降,差异有统计学意义(t=10.39,P=0.009).结论 ADSCs局部注射后可能通过旁分泌功能下调TGF-β1、Smad3及Notch1的表达,重塑细胞外基质、抑制成纤维细胞的增殖,从而抑制皮肤纤维化进程.