利用BiFC技术研究柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原1结构域Ⅰ与棒状体颈部蛋白2互作关系

• 作者: 严茗 吕凌 朱顺海 董辉 赵其平 赵宗平 陈婷 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 顶膜抗原1 棒状体颈部蛋白2 双分子荧光互补技术 互作蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 32-38
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 字数: 4452字
• 语种: 中文

摘要

为了验证柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1结构域Ⅰ(apical membrance antigen 1 domain I,EtAMA1-DⅠ)与棒状体颈部蛋白2(rhoptry neck protein 2,EtRON2)的互作关系,以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增出492 bp的EtAMA1-DⅠ片段和1395 bp的EtRON2片段,并与pGEM-T-easy载体连接构建相应重组质粒.获得的阳性重组质粒及双分子荧光互补技术的真核表达载体pBiFC-VN155和pBiFC-VC155用EcoRⅠ和BgI II进行双酶切,将EtAMA1-DⅠ、EtRON2分别与pBiFC-VN155、pBiFC-VC155连接,构建真核重组质粒pBiFC-VN155-EtAMA1-DⅠ和pBiFC-VC155-EtRON2.将2个真核重组质粒分别转染BHK细胞进行表达,经间接免疫荧光鉴定,可在BHK细胞中成功表达.将2个真核重组质粒共转染至BHK细胞中,同时将pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(deltaZIP)VC155、pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(delta)VC155共转染至细胞中分别作为阳性和阴性对照组.BiFC结果发现真核重组质粒共转染组和阳性对照组的BHK细胞均产生绿色荧光,而阴性对照组无荧光,表明EtAMA1-DⅠ与EtRON2蛋白之间存在互作关系.本研究结果为深入研究EtAMA1及EtRON2在球虫入侵过程中的功能与作用机制奠定基础.