龟甲的特异性PCR及高分辨率熔解曲线技术鉴别方法研究

• 作者: 张雪艳 方成武 胡启跳 蒋超 袁媛
• 来源期刊: 中国现代中药
• 学科: 医学
• 关键词: 龟甲 特异性聚合酶链式反应 分子鉴定 高分辨率熔解曲线
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1215-1220
• 页数: 6页
• 分类号: R282.74|R284
• 字数: 4246字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13313/j.issn.1673-4890.20190410002

摘要

目的:建立高效、稳定的龟甲Testudinis Carapax et Plastrum DNA鉴别方法.方法:利用龟甲的特异性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)鉴别方法和高分辨率熔解曲线(HRM)鉴别方法,根据龟甲及其混伪品COI序列差异,寻找特异性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点设计鉴别引物,并对PCR反应条件进行优化;并使用通用引物扩增CO1区域,产物直接进行HRM分析.结果:当退火温度为60℃,循环次数为35,使用设计的龟甲特异性鉴别引物GJ-360.F/R进行PCR扩增,经扩增均获得约360 bp特异性鉴别条带,混伪品皆无条带;使用通用引物RonM-tl和Vl-tl进行PCR扩增,产物使用HRM分析,龟甲药材在模板DNA质量浓度为3.5～87.9 ng·μL-、引物浓度为0.2 μmol· L-、镁离子浓度为2.0 mmol· L-的条件下,龟甲药材标准熔解曲线为双峰,其Tm均值分别为(83.15 ±0.76)、(87.53 ±0.69)℃.结论:特异性PCR和HRM均可作为一种快速准确鉴别龟甲正伪品的鉴定方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方成武	安徽中医药大学药学院	82	474	12.0	16.0