Rictor对小鼠胚胎干细胞来源心肌细胞线粒体钙信号的调控

• 作者: 朱丹雁 王佳丹 邵颖
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎干细胞/细胞学 肌细胞,心脏/细胞学 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 钙信号 内质网 线粒体
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 65-74
• 页数: 10页
• 分类号: R966
• 字数: 7868字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2019.02.11

摘要

目的:探索Rictor在小鼠胚胎干细胞来源心肌细胞(ESC-CM)中的表达、定位及其对线粒体钙信号的调控作用.方法:通过经典“悬滴-悬浮-贴壁”三步法建立ESC-CM模型.利用免疫荧光法及蛋白质印迹法观察Rictor在ESC-CM中的定位.慢病毒技术干扰小鼠胚胎干细胞Rictor表达后,采用免疫荧光法考察ESC-CM内质网与线粒体的叠加情况;通过透射电镜观察ESC-CM的超微结构;活细胞工作站测定分化后心肌细胞线粒体钙瞬变;免疫共沉淀法检测ESC-CM中1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)、葡萄糖调节蛋白75(Grp75)、线粒体外膜的电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)间的相互作用;蛋白质印迹法检测线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达情况.结果:Rictor在ESC-CM中主要定位于内质网及线粒体-内质网结构偶联(MAM)域,且其表达定位与线粒体及内质网有很好的叠加.干扰Rictor后,心肌细胞线粒体部分呈散点状,线粒体与内质网的叠加率降低(P＜0.01);ESC-CM超微MAM形成减少;ATP刺激引起的ESC-CM线粒体钙瞬变幅度下降,其中钙瞬变斜率和上升峰值均降低(均P＜0.01);MAM中IP3R、Grp75、VDAC1相互作用明显减弱,且Mfn2蛋白表达降低(P＜0.01).结论:干扰小鼠胚胎干细胞中Rictor表达可降低ESC-CM中钙从内质网到线粒体的释放,这可能是通过影响IP3R、Grp75、VDAC1间相互作用,减少Mfn2表达,进而破坏MAM来实现的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱丹雁	浙江大学药学院药理毒理研究所	20	124	5.0	10.0
2	邵颖	浙江大学药学院药理毒理研究所	4	30	1.0	4.0
3	王佳丹	浙江大学药学院药理毒理研究所	1	0	0.0	0.0