小鼠气管-支气管上皮细胞的气-液界面培养

• 作者: Venkataramana Sidhaye 孔晨 张伟 李强 白冲 肖华 陈思 陈长明
• 来源期刊: 中国呼吸与危重监护杂志
• 关键词: 气道表面液体层 假复层纤毛柱状上皮 气-液界面 气管-支气管上皮细胞 原代培养 跨上皮电阻 纤毛摆动频率
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 其他
• 页码范围: 362-368
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1671-6205.201903074

摘要

目的 建立一种小鼠气管-支气管上皮细胞气-液界面(ALI)培养及纤毛摆动频率测量的方法,最大程度还原气道上皮的生理功能.方法 利用1 mg/mLⅪV型链蛋白酶冷消化的方法获取BALB/c小鼠气管-支气管上皮细胞,筛选出最佳消化时长以保证所得细胞的数量及活力.差速贴壁法去除成纤维细胞后,接种于Ⅰ型鼠尾胶原预包被的Transwell小室,用不同培养基进行增殖期和ALI分化期培养.结果 采用链蛋白酶冷消化12h、14h和16h所得细胞数目分别为(1.78±0.33) ×105、(1.93±0.26) ×105和(2.01±0.28) ×105,经台盼蓝染色活细胞率分别为(96.86±0.25)％、(94.73±1.63)％和(86.87±5.95)％.1周左右细胞铺满小室,继续ALI培养2～3周后光学显微镜下可见纤毛节律性摆动,电镜及免疫荧光均证实纤毛结构.培养所得细胞纤毛摆动频率与小鼠气管在体纤毛摆动频率与一致.结论 本实验建立的气管-支气管上皮细胞分离、ALI培养及纤毛摆动频率测量体系简便、稳定、高效、可靠,为探索气道疾病的致病和治疗机制创造了基础,亦可为其他物种气道上皮和(或)其他器官上皮的培养提供参考依据.