马立克病病毒编码的miR-M11-5p宿主靶基因的筛选与鉴定

• 作者: 丁轲 余祖华 刘豪丽 刘金玲 张改平 李会珍 滕蔓 罗俊
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马立克病病毒 微小RNA miR-M11-5p hybrid-PCR 靶基因 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1026-1038
• 页数: 13页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 6493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.05.013

摘要

作为α疱疹病毒的重要成员,马立克病病毒(MDV)感染鸡可引起免疫抑制及快速发作的T细胞淋巴瘤,即马立克病(MD).此前发现MDV基因组编码大量病毒miRNA,可能在病毒复制、潜伏感染及肿瘤发生中起重要作用.基因敲除miR-M11-5p可显著增强MDV致病性及致瘤性,表明其可能是MD肿瘤抑制因子.为进一步揭示miR-M11-5p介导的调控机制,本研究利用鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA的cDNA为模板,通过hybrid-PCR扩增miR-M11-5p的候选宿主靶基因片段,然后连接至pMD19-T载体、转化至E.coli JM109中构建cDNA文库.对文库菌落进行PCR鉴定、测序分析以及Blast序列对比,共获得77个候选宿主靶基因,其中37个miRNA结合靶点位于候选靶基因的3'-UTR中.进一步通过双荧光素酶报告试验、miR-M11-5p过表达以及RT-qPCR分析,最终鉴定鸡MAFB、LOC776816和RFX7为miR-M11-5p的宿主靶基因.本研究为进一步阐明miR-M11-5p在MDV肿瘤发生中的调控机制奠定了重要基础.