马立克病病毒miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库的构建及鉴定

• 作者: 宋利娜 张改平 张雅 李会珍 滕蔓 罗俊 薛正飞 马圣明
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马立克病病毒 hybrid-PCR miR-M4-5p cDNA文库 宿主靶基因 肿瘤发生
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 348-359
• 页数: 12页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 5724字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.02.014

摘要

马立克病病毒(MDV)是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一,是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型.目前已报道MDV可编码数十种miRNA,其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物,由于miR-155与人类多种肿瘤性疾病密切相关,这意味着miR-M4-Sp可能在MDV的致瘤过程中扮演重要角色.本研究旨在构建miR-M4-5p的宿主靶基因文库并进行初步鉴定.提取鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA,反转录合成cDNA,用hybrid-PCR扩增候选靶基因片段连接到pMD19-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞后挑选单克隆进行PCR鉴定及测序,通过BLAST比对分析,共获得88个宿主候选靶基因序列.优先选择miRNA结合靶点位于mRNA 3'-UTR且与miR-M4-5p种子序列(2～7 nt)完全互补配对的29个候选靶基因,构建报告基因载体进行双荧光素酶报告试验,通过三轮双荧光素酶报告试验最终初步鉴定5个宿主靶基因:PRICK-LE1、COLA、BCA T1、ANTXR1和TEC PR1,为进一步揭示miR-M4-5p的分子调控机制奠定了重要基础.