过氧化氢对成肌细胞的氧化损伤作用研究

• 作者: 张林 李蛟龙 邢通 陈祥兴 高峰
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 过氧化氢 小鼠 成肌细胞 氧化损伤
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 营养与饲料
• 页码范围: 1016-1025
• 页数: 10页
• 分类号: S852.2
• 字数: 6232字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.05.012

摘要

旨在以体外培养的小鼠成肌细胞(C2C12)为研究对象,探讨氧化损伤可能的路径.本试验分为3个处理组,每个处理组6个重复.处理组分别为:对照组(Control),以DMEM培养基培养的细胞作为空白对照,培养24 h;吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组(PDTC),以每个孔1 mL的PDTC(20 μmol·L-1)孵育细胞24 h;H2O2组(H2O2),加入0.5 mmol· L-1的H2O2处理细胞24 h.检测各组细胞的存活率、ROS水平与凋亡率,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印记法检测细胞凋亡和自噬相关基因的表达以及NF-κB信号通路相关因子的表达.结果表明,与对照组相比,PDTC可显著提高细胞的总凋亡率(P＜0.05),可显著上调细胞半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-6、caspase-9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平(P＜0.05),显著上调Beclin1的mRNA表达量和微管相关蛋白1轻链3 (LC3)-Ⅱ/Ⅰ的值以及LC3-Ⅱ蛋白表达水平(P＜0.05),显著下调核因子kappa B副族1(p50)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白(Bcl-2)、v-rel禽网状内皮增生病病毒癌基因同源物A(RelA)和环氧合酶(Cox)-2的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平(P＜0.05);H2O2可显著提高细胞的ROS水平和细胞总凋亡率(P＜0.05),可显著上调caspase-3、caspase-6、caspase-8、caspase-9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平(P＜0.05),显著上调Beclin1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的mRNA表达量以及LC3-Ⅱ蛋白表达水平(P＜0.05),显著提高Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达量(P＜0.05),显著下调p50、Bcl-2、RelA和Cox-1、Cox-2的mRNA表达量以及核因子kappa B(NF-κB)蛋白表达水平(P＜0.05).结果提示,H2O2会引起C2C12细胞的ROS升高,并且能够通过抑制NF-κB信号通路介导细胞凋亡和自噬的发生,这与NF-κB因子的特异性抑制剂PDTC的作用相类似.