目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱(isotope dilution chromatography tandem mass spectrometry,ID-LC/MS)测定人血清同型半胱氨酸(Hcy)参考方法,并运用于临床实验室室间质评(external quality assessment,EQA)样本靶值的确立.方法 参照国际检验医学溯源联合委员会(the Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine,JCTLM)推荐方法,建立本实验室Hcy参考方法,并对所建方法的精密度、正确度、特异性、残留、基质效应等进行评估,并将建立的参考方法用于上海地区2018年度第二次EQA样本Hcy靶值的确立.结果 该方法3 d 3批次检测12.5μmol/L和37.4μmol/L样本,批间CV分别为1.03%和2.10%,精密度较好;检测美国国家标准和技术研究院(National Institute of Standards and Technology,NIST)标准参考物质(standard reference material,SRM)1955均在规定的不确定度范围内;无基质效应和携带污染.2018年第二次EQA数据显示国产试剂组均值低于参考方法赋值结果,进口试剂组均值高于参考方法赋值结果.结论 建立的ID-LC/MS/MS测定血清Hcy参考方法精密度、正确度、特异性均较好,无分析物残留,有望在临床实验室Hcy测定的量值溯源中发挥一定作用.