miR-497靶向调控疾病易感基因EFNB2的分子机制研究

• 作者: 孟凡波 张蕊 李琦 王一心 王玉琛 许华阳 邓红利 马建兵 马捷
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 精神分裂症 miR-497 EFNB2 靶基因 分子机制
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 17-22
• 页数: 6页
• 分类号: R749.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201901003

摘要

目的 用分子克隆和双荧光素酶报告基因的方法研究miR-497对精神分裂症易感基因EFNB2的靶向调控作用,为miR-497在精神分裂症中的分子功能研究奠定基础.方法 运用生物信息学在线软件预测,发现与精神分裂症相关的miR-497可能直接调控疾病易感基因EFNB2.随后采用分子生物学技术扩增EFNB2基因3'-UTR中包含与miR-497种子序列相结合的片段,将该片段连接入pmirGLO质粒载体构建野生型的重组体(WT),并突变EFNB2基因3'-UTR与种子序列相结合的碱基序列,构建突变型的重组体(MUT).最后将miR-497阴性对照(NC)和模拟物(mimics)分组转染HEK293T细胞系,并在24、48 h后分别进行双荧光素酶报告基因活性测定.结果 测序结果表明EFNB2基因3'-UTR的野生型(WT)和突变型(MUT)分别成功构建入pmirGLO载体中,表明WT和MUT的重组体均构建成功.转染24、48 h后的双荧光素酶报告基因活性检测结果表明,miR-497 mimics与NC相比,显著性降低了报告基因的活性.结论 本研究在细胞水平证明了miR-497可直接调控精神分裂症易感基因EFNB2,为后续miR-497在精神分裂症中的功能研究提供了新思路和新线索.