单增李斯特菌核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对其降解RNA活性的影响

• 作者: 乔军 伍晔晖 孟庆玲 才学鹏 王登峰 王立霞 蔡扩军 郭晶
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 单核细胞增生李斯特菌 核糖核酸酶RnaseⅢ rncS基因 降解活性
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 110-116
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0861

摘要

为研究单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶RnaseⅢRncS氨基酸突变对RNA降解活性的影响.利用生物信息学软件分析单核细胞增生李斯特菌(LM)野毒株SB5中rncS基因编码的RnaseⅢ的结构域,并选择关键氨基酸利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对其进行了基因突变;然后将rncS突变基因片段D50A、E122A克隆至表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达;应用SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组蛋白的表达情况及其抗原特异性;通过体外酶活试验研究其对RNA降解活性的影响.结构域分析结果显示,LM-RnaseⅢ氨基酸序列含有1个双链RNA结合结构域(DSRM)和1个核酸酶结构域(RIBOc),其中结构域RIBOc含有5个活性位点.SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组突变型RnaseⅢ-D50A和RnaseⅢ-E122 A蛋白相对分子质量均为42.5 kD,与理论值相符;Western blot分析表明重组突变型RnaseⅢ-1)50A和RnaseⅢ-E122A蛋白可与LM阳性血清发生免疫学反应.体外酶活实验表明,RnaseⅢ发挥降解活性依赖于Mn2+或Mg2+,将其第50位天冬氨酸突变后,RnaseⅢRncS的降解活性有所降低(P＜0.001);第122位谷氨酸突变后,RnaseⅢRncS降解活性极显著下降(P＜0.0001),提示第122位谷氨酸是维持LM RnaseⅢRncS酶活性的关键位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	才学鹏	中国农业科学院兰州兽医研究所	141	790	15.0	21.0
2	王登峰	新疆畜牧科学院兽医研究所	29	182	7.0	12.0
3	乔军	石河子大学动物科技学院	103	346	8.0	14.0
4	蔡扩军		39	73	5.0	6.0
5	孟庆玲	石河子大学动物科技学院	77	254	7.0	13.0
6	伍晔晖	石河子大学动物科技学院	12	17	2.0	4.0
7	王立霞	石河子大学动物科技学院	7	4	1.0	2.0
8	郭晶	石河子大学动物科技学院	6	1	1.0	1.0