一种基于丝裂霉素诱导的人脂肪干细胞衰老模型

• 作者: 刘亭亭 刘新光 孙雪荣 廖小欣 张明萌 彭健愉 李晓毅 赵威 陈艺琳 饶敏腊
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 脂肪干细胞 细胞衰老 衰老相关分泌表型 丝裂霉素
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 415-420
• 页数: 6页
• 分类号: Q255
• 字数: 3438字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种简单有效的人脂肪干细胞 (adipose-derived stem cells, ADSCs) 衰老模型, 为研究ADSCs衰老机制及抗衰老药物筛选奠定基础.方法 分别用0. 5μg/ml, 1μg/ml和3μg/ml的丝裂霉素 (MMC) 处理ADSCs, 以正常培养组作为阴性对照 (NC), 利用β-gal活性染色检测不同浓度MMC对ADSCs衰老情况的影响;然后将正常培养与0. 5μg/ml MMC处理的ADSCs分别进行高通量芯片检测, 分析找出两组ADSCs差异表达的衰老相关基因;利用q RT-PCR和ELISA验证部分SASP (IL-6、IL-8、IL-1α、IL-1β和TNF-α) 及其他衰老相关基因 (p16、p21、p53) 的表达, 并用Western blot检测p21和γ·H2AX的表达.结果 与正常培养的ADSCs相比, 0. 5μg/ml, 1μg/ml和3μg/ml MMC均可诱导ADSCs增殖停滞, 细胞体积增大, β-gal染色阳性率升高 (P ＜0. 01) .RNA芯片检测发现, MMC处理的ADSCs富集了多种衰老相关分泌表型 (SASP) 基因, 包括IL-6、IL-8、IL-1α、IL-1β和TNF-α.在MMC (0. 5μg/ml) 处理ADSCs后第7天, Western blot结果显示, 细胞表达p21和γ·H2AX蛋白明显上调, q RT-PCR和ELISA检测表明, SASP基因IL-6、IL-8、IL-1α和IL-1β表达和 (或) 分泌出现一定程度上调, 其中IL-1α和IL-1β表达差异有统计学意义 (P ＜0. 05), TNF-α、p16、p21、p53无明显变化 (P＞ 0. 05) .结论 MMC处理的ADSCs表现出细胞衰老的一般特点, 并可分泌多种衰老相关SASP.本文成功建立了一种基于MMC诱导的、具有典型衰老特征的ADSCs衰老细胞模型.