猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪Delta冠状病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 尹彦文 屈素洁 施开创 王睿敏 莫胜兰 谢守玉 陆文俊 黎宗强
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪Delta冠状病毒 猪轮状病毒 多重RT-PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 190-198
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0006

摘要

针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)基因序列,分别设计特异性引物,扩增PEDV N基因(750 bp)、TGEV M基因(544 bp)、PDCoV N基因(183 bp)和PRoV VP6基因(329 bp).经过对引物浓度、退火温度等反应条件的优化及特异性、敏感性、重复性试验,成功建立了快速鉴别检测PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的多重RT-PCR方法.该方法仅对PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV检测为阳性,对口蹄疫病毒(FMDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)等主要病毒的扩增均为阴性.PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV重组质粒标准品的检出下限分别为1.57×102、1.57×103、1.57×102、1.57×102 copies/μL.相同条件下的重复性试验获得均匀一致的结果.应用所建立的方法检测2017-2018年采集自广西各地的270份腹泻病料,结果显示,PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的阳性率分别为15.56％、11.48％、10.74％、1.85％,并且存在混合感染现象.上述结果表明,所建立的多重RT-PCR方法可用于PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的快速鉴别检测及流行病学调查.