摘要:
目的 研究力学刺激对半月板纤维软骨细胞(meniscal fibrochondrocytes,MFs)凋亡的影响,并探讨可能的分子机制.方法 通过酶消化法从大鼠半月板组织中分离MFs,实验首先分为两组:对照组(无力学刺激)和力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d),通过力学刺激仪器诱导MFs损伤细胞模型,CCK-8法和流式细胞术分别检测力学刺激对MFs活力和凋亡的影响.然后将实验分为四组:对照组(无力学刺激)、力学刺激组(10%牵张力,0.5 Hz,8 h/d)、对照siRNA(NC-siRNA)力学刺激组和干扰α5β1(α5β1 siRNA)力学刺激组,其中α5β1 siRNA和NC-siRNA力学刺激组细胞通过lipofectamine 2000将α5β1 siRNA和对照siRNA转染到MFs,然后进行力学刺激;CCK-8法和流式细胞术分别检测α5β1 siRNA和力学刺激对MFs活力和凋亡的影响;Western blot检测力学刺激和α5β1 siRNA对MFs Bcl2和cleaved caspase3蛋白表达的影响.结果 CCK-8结果显示,与对照组细胞活力比较,力学刺激组MFs细胞活力显著降低;与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞活力显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01).流式检测结果显示,与对照组比较,力学刺激组MFs细胞凋亡率明显升高;与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞凋亡率显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01).Western blot结果显示,与对照组比较,力学刺激组MFs细胞Bcl2表达显著降低,α5β1和cleaved caspase3表达明显升高;而与NC-siRNA力学刺激组相比,α5β1 siRNA力学刺激组细胞Bcl2表达显著升高,α5β1和cleaved caspase3表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 力学刺激可能通过促进整合素α5β1表达,抑制Bcl2表达,促进cleaved caspase3表达,激活线粒体凋亡通路,促进MFs凋亡.