高通量测序筛选与骨肉瘤化疗耐药相关的环状RNA分子表达谱

• 作者: 张春林 朱昆鹏 马小龙
• 来源期刊: 中华骨科杂志
• 关键词: 肉瘤 RNA 抗药性,肿瘤 微RNAs 高通量筛选分析
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 获奖论文
• 页码范围: 336-345
• 页数: 10页
• 字数: 7262字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2352.2019.06.003

摘要

目的 通过高通量测序筛选与骨肉瘤化疗耐药相关的环状RNA表达谱,并初步分析、鉴定其可能的分子功能.方法 采用CCK-8实验检测三对配对的耐药和敏感人骨肉瘤细胞系(MG63/DXR vs MG63、U2OS/DXR vsU20S、KHOS/DXR vs KHOS)对于三种常用骨肉瘤化疗药物(多柔比星、顺铂、甲氨蝶呤)的敏感性.后采用下一代高通量RNA测序技术,在三对配对的化疗多药耐药和敏感的入骨肉瘤细胞系中进行circRNA表达谱的比较分析.使用实时定量PCR(qRT-PCR)在化疗耐药骨肉瘤细胞系和组织中确认测序数据的可靠性和准确性.此外,还进行包括GO、KEGG通路分析和circRNA-miRNA网络构建在内的多种生物信息学分析,以预测差异表达的circRNA的潜在分子功能,构建相关的可能调控通路或网络.结果 三种骨肉瘤耐药细胞(MG63/DXR、U2OS/DXR、KHOS/DXR)对于三种常见的骨肉瘤化疗药物均较对照组细胞(MG63、U2OS、KHOS)具有明显的抵抗性;RNA测序共检测到80个组间差异表达的circRNAs,相对于药物敏感的骨肉瘤细胞,药物抵抗骨肉瘤细胞系中,57个circRNAs表达上调,23个circRNAs表达下调(组间差异倍数≥2或≤0.5).随机选择其中的10个circRNA行qRT-PCR验证,发现有9个qRT-PCR的检测结果与测序结果一致;此外,KEGG通路分析结果显示56个通路在差异表达的circRNAs中被显著富集,包括糖酵解/糖异生、ABC转运蛋白、VEGF信号通路等等.此外,发现在化疗耐药的骨肉瘤细胞和组织中,上调倍数最高的circRNA-hsa_circ_0004674明显高表达,与骨肉瘤患者的预后不良有关.通过权威数据库(TargetScan和miRanda)和文献搜索,构建了与hsa_circ_0004674相关的一些潜在的内源竞争性RNA(ceRNA)调控通路,例如hsa_ circ_ 0004674-miR-490-3p-ABCC2和hsa_ circ_ 0004674-miR-1254-EGFR等,并预测了与hsa_circ_0004674存在潜在ceRNA调控关系的miRNA之间的miRNA反应元件序列.结论 CircRNA与肿瘤的进展密切相关,可能在骨肉瘤化疗耐药中发挥作用,而hsa_circ_0004674可能是逆转耐药性的潜在候选靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马小龙	同济大学附属上海市第十人民医院骨科	3	22	2.0	3.0
5	朱昆鹏	同济大学附属上海市第十人民医院骨科	2	5	1.0	2.0
9	张春林	同济大学附属上海市第十人民医院骨科	9	19	3.0	3.0