沉默Herg1的表达对骨肉瘤增殖和侵袭的影响

• 作者: 叶文斌 吴进 宋伟 宋超 张英梅 曾文容 陈志达
• 来源期刊: 中华肿瘤杂志
• 关键词: 骨肉瘤 Herg1 Hippo信号通路 增殖 侵袭
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 338-345
• 页数: 8页
• 字数: 6138字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253?3766.2019.05.004

摘要

目的 观察沉默Herg1的表达对骨肉瘤增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的调控机制.方法 构建重组腺病毒载体Ad5?Herg1?shRNA并检测其转染效能.分别采用细胞计数试剂盒8 (CCK?8)法、划痕实验、Transwell实验、肿瘤生长曲线和活体成像检测Ad5?Herg1?shRNA转染后人骨肉瘤细胞株143B、U2OS的增殖、迁移和侵袭能力变化,采用串联亲和纯化／质谱法寻找可能与Herg1相互作用的蛋白并进行鉴定,采用 Western blot 法检测转染前后骨肉瘤细胞中大肿瘤抑制因子1 (LATS1)、Yes激酶相关蛋白(YAP)及其磷酸化后的表达变化.结果 Ad5?Herg1?shRNA转染能有效抑制骨肉瘤细胞中 Herg1 的表达. CCK?8 法检测结果显示, Ad5?Herg1?shRNA1 组和 Ad5?Herg1?shRNA2组143B细胞的存活率分别为(65.47±3.90)%和(79.90±1.52)%,U2OS细胞的存活率分别为(69.69±1.36)%和(76.72±2.75)%,均明显低于Ad5?control?shRNA组(均P＜0.001).划痕实验显示, Ad5?Herg1?shRNA1组和Ad5?Herg1?shRNA2组143B细胞的迁移率分别为(33.03±2.88)%和(36.47± 4.16)%,U2OS 细胞的迁移率分别为( 68.07 ± 0.90)%和( 73.97 ± 1.25)%,均明显低于 Ad5?control?shRNA组(均 P＜0.001). Transwell 侵袭实验显示, Ad5?Herg1?shRNA1 组和 Ad5?Herg1?shRNA2 组143B细胞的侵袭细胞数分别为(36.50±12.15)个和(44.83±7.62)个,U2OS细胞的侵袭细胞数分别为(21.83±7.99)个和(22.85±7.08)个,均明显低于Ad5?control?shRNA组(均P＜0.001).体内实验结果显示,从第14天起,Ad5?Herg1?shRNA1组裸鼠骨肉瘤体积小于Ad5?control?shRNA组(P＜0.001).接种5周后,Ad5?Herg1?shRNA1组瘤重为(0.36±0.10) g,低于Ad5?control?shRNA组( P＜0.001).裸鼠活体成像显示,Ad5?control?shRNA组明显可见其他部位肿瘤转移且荧光信号值高,而Ad5?Herg1?shRNA1未见其他部位的肿瘤转移. Herg1蛋白与2型神经纤维瘤(NF2)蛋白相互作用,沉默Herg1可明显下调骨肉瘤中LATS1和YAP蛋白的表达,并促进LATS1和YAP 的磷酸化.结论 Herg1可能通过调控Hippo信号通路参与骨肉瘤的增殖和侵袭过程,其有望成为骨肉瘤治疗的潜在靶点.