氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸对破骨细胞自噬和分化的影响

• 作者: 仝锡帅 刘宗平 赵鸿雁 郑嘉铭 陈苗苗 顾建红
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 破骨细胞 腺苷酸活化蛋白激酶 自噬
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 临床兽医
• 页码范围: 2339-2347
• 页数: 9页
• 分类号: S852.23
• 字数: 5395字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.11.019

摘要

为了探究氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(AICAR)对破骨细胞自噬及分化能力的影响,以BALB/c小鼠骨髓巨噬细胞诱导分化形成的破骨细胞为研究对象,添加0.5 mmol·mL-1 AICAR(AMPK激活剂)处理4h后,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨细胞;CCK-8法检测破骨细胞存活率;高内涵系统分析TRAP+细胞比率、面积、荧光强度及圆度;蛋白免疫印迹(Western blot)和荧光定量聚合酶链式反应方法(qRT-PCR)检测AMPK、NFATc1、c-Fos、CTSK、TRAP、(LC3-Ⅱ)、ATG5、Beclin1、p62的mRNA和蛋白水平;激光共聚焦显微镜观察EG-FP-pmCherry-LC3荧光聚点.结果 显示,通过30 ng· mL-1M-CSF和60 ng· mL-1 RANKL诱导分化4d的细胞TRAP染色后大部分呈阳性且细胞核数目≥3.AICAR处理后,与对照组相比,细胞存活率无显著差异(P＞0.05),但细胞面积、TRAP+(细胞核数目≥3)细胞率、TRAP荧光强度显著下降(P＜0.05).AICAR组破骨细胞c-Fos、TRAP(P＜0.01)、p62(P＜0.05)的mRNA水平显著下降,LC3、ATG5的mRNA水平显著升高(P＜0.05).AICAR处理致AMPKα蛋白磷酸化水平极显著升高(P＜0.01),NFATcl、c-Fos、CTSK、p62(P＜0.01)和TRAP(P＜0.05)蛋白表达量显著下调,LC3-Ⅱ、ATG5和Beclin1蛋白表达水平极显著上调(P＜0.01).转染LC3质粒结果显示AICAR处理后LC3黄色及红色荧光聚点数目增多,绿色荧光聚点数目减少.结果 表明0.5 mmol· mL-1AICAR作用4h可激活破骨细胞AMPKα,增强破骨细胞的自噬水平,但抑制了破骨细胞的分化.