Cre/Loxp系统介导转基因山羊乳腺上皮细胞标记基因的删除

• 作者: 于康英 周鸣鸣 宋绍征 张婷 成勇 潘生强 陆睿 陈朝军
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 标记基因 Cre/Loxp hLF 乳腺上皮细胞 诱导
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 105-111
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0544

摘要

为了消除核移植转基因动物中标记基因潜在的生物安全风险,应用Cre/Loxp系统删除人乳铁蛋白(hLF)转基因山羊乳腺上皮细胞的标记基因,并以此探索标记基因删除前后对功能基因乳腺特异性表达的影响.首先复苏hLF转基因山羊乳腺上皮细胞并纯化;然后电转染PBS185纯化质粒,培养10-14 d,胰蛋白酶消化细胞,通过自制口控式移卵针挑取单克隆细胞;最后PCR检测标记基因是否删除,催乳素诱导表达,ELISA和Western Blot检测功能蛋白hLF的表达情况.结果表明,共获得65株单克隆乳腺上皮细胞,挑取状态较好的18株用于PCR检测,有3株为删除标记基因的细胞株,删除效率达16.7％(3/18),且删除标记基因细胞株表达水平提高约8倍(2.85 g·L-1/0.35 g·L-1),蛋白条带大小与目标蛋白一致(80 kD).结果表明Cre/Loxp系统能够有效的删除乳腺上皮细胞基因组上的标记基因,且删除后细胞株表达水平明显提高,成功建立一套转基因山羊乳腺上皮细胞标记基因删除的系统,为进一步扩大生产无标记基因的转基因山羊奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成勇	扬州大学兽医学院江苏省转基因动物制药工程研究中心	35	145	8.0	9.0
2	陆睿	扬州大学兽医学院江苏省转基因动物制药工程研究中心	8	4	1.0	1.0
3	张婷	扬州大学兽医学院江苏省转基因动物制药工程研究中心	18	45	3.0	6.0
4	宋绍征	无锡太湖学院护理学院	8	0	0.0	0.0
5	于康英	无锡太湖学院护理学院	6	1	1.0	1.0
6	陈朝军	无锡太湖学院护理学院	4	0	0.0	0.0
7	潘生强	无锡太湖学院护理学院	3	0	0.0	0.0