新型H7N9禽流感病毒NA蛋白胞外区片段的生物信息学分析及其多克隆抗体制备

• 作者: 仇书兴 刘雪贺 张家友 杨晓明 殷俊磊 殷星 苏淑娟 贾坤义
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: H7N9禽流感病毒 生物信息学 NA蛋白胞外区 亲和纯化 多抗
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 85-93
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0762

摘要

旨为以原核表达系统表达、纯化新型H7N9禽流感病毒(安徽株)NA蛋白胞外区片段并制备该蛋白的多克隆抗体.对新型H7N9禽流感病毒神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)蛋白胞外区片段进行生物信息学分析,基于大肠杆菌密码子偏爱性进行密码子优化并合成该蛋白编码基因.将构建的重组质粒pET28b-tN9(Truncated N9)转化至E.coli BL21(DE3)、E.coli Rosetta和E.coli Arctic Express(DE3),进行诱导表达,并进行SDS-PAGE鉴定.选取E.coli BL21(DE3)重组菌进行放大培养、IPTG诱导并对诱导产物进行镍柱纯化、SDS-PAGE分析和质谱鉴定.将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以Western blotting和间接ELISA法检测抗体特异性及效价.成功表达并纯化目标蛋白,Western blotting显示制备的多克隆抗体能特异性识别重组蛋白和新型H7N9禽流感病毒(上海株),间接ELISA方法检测制备的多克隆抗体,效价为1:256000.利用原核表达系统高效表达并纯化了tN9蛋白,制备的多克隆抗体效价高,特异性强,旨为深入探索NA蛋白结构及功能、H7N9禽流感病毒致病机制和建立快速检测方法奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	仇书兴	新乡学院医学院	2	1	1.0	1.0
2	杨晓明		4	5	1.0	1.0
3	殷星	新乡学院医学院	1	1	1.0	1.0
4	苏淑娟		1	1	1.0	1.0
5	殷俊磊	新乡学院医学院	1	1	1.0	1.0
6	张家友		1	1	1.0	1.0
7	刘雪贺	新乡学院医学院	1	1	1.0	1.0
8	贾坤义	新乡学院医学院	1	1	1.0	1.0