棉铃虫中肠特异性结合蛋白ABCC1对Cry1Ac毒力的影响

• 作者: 刘臣 张彩虹 梁革梅 牛琳琳 陈琳 魏纪珍
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 棉铃虫 ABCC1 苏云金芽孢杆菌 Cry1Ac 结合蛋白 毒力
• 年，卷（期）: 2019,（19）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 3337-3345
• 页数: 9页
• 字数: 6851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2019.19.005

摘要

[目的]研究棉铃虫(Helicoverpa armigera)中肠蛋白ABCC1 (HaABCC1)与Cry1Ac的结合特性及对Cry1Ac毒力的影响,明确HaABCC1在Cry1Ac杀虫机制中的作用.[方法]分析HaABCC1基因序列,设计引物,通过原核表达得到HaABCC1两个跨膜区片段的蛋白,与Cry1Ac进行Ligand blot试验,验证其与Cry1Ac的体外结合特性;利用RNAi技术干扰棉铃虫幼虫的HaABCC1,在3龄幼虫腹部注射siABCC1,比较HaABCC1的表达量及Cry1Ac处理后棉铃虫死亡率的变化;通过细胞转染将ABCC1导入Sf9细胞系中,确定pAc-ABCC1重组质粒转入Sf9细胞后,用细胞生物测定的方法比较Cry1Ac处理后细胞死亡率的变化;比较敏感品系(96S)和Cry1Ac抗性品系(BtR)棉铃虫的HaABCC1基因全长序列,并通过荧光定量RT-PCR检测HaABCC1在抗、感棉铃虫中的表达量.[结果]HaABCC1跨膜区TMD1和TMD2在Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞中成功表达,两个HaABCC1跨膜区片段蛋白均能与活化的Cry1Ac在体外结合;棉铃虫注射siABCC1后,HaABCC1的表达量显著下降,与未注射的棉铃虫、注射DEPC水和siEGFP的棉铃虫相比,用活化的Cry1Ac蛋白处理HaABCC1被干扰的棉铃虫,其幼虫死亡率显著降低,表明棉铃虫幼虫的HaABCC1被干扰后,能显著降低Cry1Ac对棉铃虫的毒力;用活化的Cry1Ac蛋白处理成功转入HaABCC1的Sf9细胞,与对照Sf9细胞相比,细胞的死亡率明显上升,表明将HaABCC1导入Sf9后能显著提高Cry1Ac处理后的细胞死亡率;抗性品系(BtR)与敏感品系(96S)棉铃虫的HaABCC1氨基酸序列没有差别,但抗性品系BtR棉铃虫HaABCC1的表达量显著降低.[结论] HaABCC1是Cry1Ac的特异性结合蛋白,可能是Cry1Ac的功能受体蛋白,并可能参与对Cry1Ac的抗性机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁革梅		49	829	14.0	28.0
4	陈琳	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	14	7	2.0	2.0
5	牛琳琳	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	2	0	0.0	0.0
9	魏纪珍	河南农业大学植物保护学院	4	0	0.0	0.0
10	刘臣	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	2	2	1.0	1.0
11	张彩虹	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0