CSFV强弱毒株双重RT-PCR方法的建立与应用

• 作者: 何玲 周怡 杨美 王开功 王柏林 程振涛
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 弱毒疫苗毒 双重RT-PCR 特异性 敏感性 快速鉴别 临床应用
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 82-85
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.11.0444

摘要

为了建立一种能在临床上快速鉴别猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)野毒和弱毒疫苗毒的检测方法,试验在对多株CSFV基因组序列比对分析后,选择特异保守区域设计2对引物构建CSFV强弱毒株双重RT-PCR方法,优化其退火温度,并检测该方法的特异性、敏感性及临床应用效果.结果 表明:试验建立的双重RT-PCR方法能从CSFV弱毒疫苗毒和临床野毒株基因组中扩增出大小分别为447 bp和343 bp的特异性基因片段;最佳退火温度为55℃;应用该方法分别对繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗毒、猪口蹄疫病毒(FMDV)灭活疫苗毒、猪乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗毒总RNA和猪伪狂犬病毒(PRV)灭活疫苗毒、猪细小病毒(PPV)灭活疫苗毒、猪圆环病毒(PCV)灭活疫苗毒的总DNA进行检测,均未见特异性条带,特异性好;对CSFV疫苗弱毒的最低RNA检出量为6.28 ng,敏感性高;对临床混合感染病料进行检测,能同时或单独检测到CSFV强毒和CSFV弱毒疫苗毒核酸.说明试验建立的双重RT-PCR方法特异性好,敏感性高,可用于CSFV强弱毒株的检测.