检测猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性和经典毒株可视化RT-LAMP方法的建立

• 作者: 冯全文 周宏超 李鑫鑫 杨飞 王凯 王韦华 田昊伦 罗丽华 范志新 郭抗抗
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 猪繁殖与呼吸综合征病毒 逆转录环介导等温核酸扩增 病毒检测
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1660-1666,1673
• 页数: 8页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.09.02

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是目前影响养猪业的重要病毒之一,国内PRRSV是以美洲型为主,根据致病性的强弱又可分为高致病性(HP)和经典性PRRSV毒株,高致病性PRRSV是引起国内2006年“猪高热病”的主要病原.PRRSV属于条件性致病病毒,对PRRSV感染猪和发病猪的准确、快速检测是采取有效措施的前提和依据.环介导等温扩增技术(LAMP)是一种敏感、快速、操作相对简便的核酸扩增技术,整个反应在单一温度下进行,反应结果可以通过肉眼观察,在动物病原检测方面应用较多.本试验通过GenBank获得了HP-PRRSV和经典PRRSV分离株序列,选择2种毒株共同的保守基因区段,设计了用于检测PRRSV的RT-LAMP引物.通过对反应体系、反应温度、特异性、敏感性等优化,建立了检测PRRSV的RT-LAMP方法.建立的方法总体系为25μL,外引物终浓度为0.20 μmol/L、内引物终浓度为1.60 μmol/L,63.0℃恒温作用1h,给反应产物中加入1 μL SYBR GreenⅠ,阳性结果呈绿色,紫外光下可见荧光,阴性结果呈橙色,紫外光下无荧光.方法 对PRRSV RNA的最低检测质量浓度为9.44×10-5 mg/L.用建立的方法对临床送检的19份猪样品(血清和组织)进行检测,与国标(GB/T 27517-2011)的HP-PRRSV和PRRSV双重RT-PCR检测方法进行对比,双重RT-PCR方法检测出6份阳性,RT-LAMP方法检测出8份阳性.本试验建立了检测PRRSV经典毒株和高致病毒株的RT-LAMP方法,为PRRSV的检测提供了可选择的方法.