人晶状体上皮细胞BHMT基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 周海燕 王新川 薛雨顺 高宁宁
• 来源期刊: 陕西医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 人晶状体上皮细胞 甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶 过表达 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 963-967
• 页数: 5页
• 分类号: R365
• 字数: 3651字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7377.2019.08.001

摘要

目的:构建甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)基因过表达慢病毒载体,并检测其在人晶状体上皮细胞中的表达效果.方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增制备目的基因片段,构建BHMT慢病毒过表达载体,转染至293T细胞.运用免疫荧光法行病毒滴度检测,并利用荧光显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的表达,运用RT-PCR、Western blot检测鉴定BHMTmRNA蛋白的表达水平.将构建成功的慢病毒载体BHMT-GV358感染人晶状体上皮细胞,观察目的基因表达.结果:重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光,在稳定转染的细胞中BHMT及蛋白的表达水平较未转染细胞显著增高(P<0.05),体外转染人晶状体上皮细胞,荧光显微镜下可见BHMT表达.结论:成功构建过表达BHMT的慢病毒载体,并有效感染人晶状体上皮细胞,为进一步研究BHMT在白内障发生发展中的作用提供生物学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛雨顺	陕西省人民医院眼科	29	150	7.0	11.0
2	周海燕	陕西省人民医院眼科	10	21	2.0	4.0
3	王新川	空军军医大学基础医学院	4	1	1.0	1.0
4	高宁宁	陕西省人民医院眼科	2	1	1.0	1.0