摘要:
目的 探讨Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)-基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotein,MMP-2)/基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein,MMP-9)信号通路在氧糖剥夺-复糖复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用.方法 离体培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12,以1×106/mL接种于6孔板(每孔2 mL)或1×104/mL接种于96孔板(每孔200μL),采用随机数字表法将36孔样本分为4组,对照组(C组)、氧糖剥夺组(O组),TAK242+氧糖剥夺组(TO组),CCT+氧糖剥夺处理组(MO组),每组6孔.O、TO和MO组人脐静脉内皮细胞接受氧糖剥夺6 h后复糖复氧24 h;TO和MO组人脐静脉内皮细胞接受氧糖剥夺前1 h向培养基中分别加入TLR4特异性阻断剂TAK242(10μmol/mL)和MMP-2/MMP-9特异性抑制剂CCT(200μg/mL);对照组(C组)人脐静脉内皮细胞正常培养.按照各组处理收集细胞,Annexin V-FITC/PI双染色-流式细胞法测定细胞凋亡率,MTT法测定细胞生存率,Transwell法检测HUVEC-12细胞电阻值及渗透性,酶联免疫吸附测定法检测TNF-α和IL-1β浓度,Western blot法测定MMP-2、MMP-9表达.结果 与C组比较,O组、TO组和MO组HUVEC-12细胞凋亡率和葡聚糖-FITC荧光强度升高,存活率和电阻值降低,TNF-α、IL-1β、MMP-2和MMP-9表达水平升高(P<0.05);与O组比较,TO组HUVEC-12细胞凋亡率和葡聚糖-FITC荧光强度降低,存活率和电阻值升高,TNF-α、IL-1β、MMP-2和MMP-9表达水平下降(P<0.05);与O组比较,MO组HUVEC-12细胞凋亡率和葡聚糖-FITC荧光强度降低,存活率和电阻值升高,TNF-α和IL-1β表达水平下降(P<0.05);与TO组比较,MO组HUVEC-12细胞凋亡率和葡聚糖-FITC荧光强度升高,存活率和电阻值降低,TNF-α、IL-1β、MMP-2和MMP-9表达水平升高.结论 氧糖剥夺-复糖复氧诱导 HUVEC-12 细胞凋亡的机制可能与激活 TLR4-MMP-2/MMP-9 信号通路相关.