肉用杂交犊牛小肠上皮细胞的分离培养和鉴定

• 作者: 万发春 刘倚帆 姜富贵 宋恩亮 张相伦 游伟 谭秀文
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犊牛 小肠上皮细胞 联合消化法 细胞鉴定 核型分析
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 2278-2286
• 页数: 9页
• 分类号: S823
• 字数: 6135字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2019.05.034

摘要

本试验旨在建立肉用杂交犊牛小肠上皮细胞分离培养和鉴定的方法,为研究犊牛小肠上皮细胞营养吸收、免疫调控及肠道屏障功能提供原代细胞培养模型.选用新生未吮乳的肉用杂交犊牛的空肠组织,应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法对小肠上皮细胞进行分离,应用相差消化法和相差贴壁法对犊牛小肠上皮细胞进行纯化.通过细胞形态学观察、生长曲线、免疫荧光及染色体核型分析等方法来鉴定细胞.结果 表明:1)应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法得到的犊牛小肠上皮细胞生长状况良好,经纯化后得到90％以上纯度的犊牛小肠上皮细胞,并稳定传代至10代以上;2)犊牛小肠上皮细胞的生长曲线为“S”形,符合细胞增殖规律;3)免疫荧光鉴定犊牛小肠上皮细胞特异性表达角蛋白13和绒毛蛋白;4)透射电镜观察发现犊牛小肠上皮细胞边缘有微绒毛结构,细胞与细胞之间的紧密连接结构清晰可见;5)染色体核型分析显示细胞内含有60条染色体,形态正常,呈二倍体核型.综上所述,应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化及相差贴壁纯化成功得到犊牛小肠上皮细胞,为研究犊牛小肠上皮细胞营养物质吸收、免疫调控和肠道屏障功能提供了细胞素材.