miR-21靶向调控Bcl-2对肠道上皮HT29细胞凋亡的影响及机制研究

• 作者: 孔郁 王卫卫 石亮 邢文韬 高巧营 魏思忱 魏新亮
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-21 Bcl-2 溃疡性结肠炎 凋亡
• 年，卷（期）: 2019,（20）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 2457-2463
• 页数: 7页
• 分类号: R574.62
• 字数: 5997字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2019.20.005

摘要

目的:探究微小型RNA-21(microRNA-21,miR-21)对肠道上皮HT29细胞凋亡的影响及作用机制.方法:利用RT-PCR检测B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)与miR-21在结肠组织和HT29细胞系中的mRNA水平.利用生物信息预测Bcl-2与miR-21的结合位点,通过荧光素酶报告进一步验证.将细胞分为HT29组、miR-21 inhibitor组、Bcl-2 siRNA(si-Bcl-2)组和si-Bcl-2+miR-21 inhibitor组,miR-21 inhibitor组和si-Bcl-2组分别或同时转染经TNF-α预处理的HT29细胞后,用MTT检测细胞存活情况,流式检测细胞凋亡情况,免疫印迹检测Bcl-2、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达情况,ELISA检测炎症细胞因子IL-6、IL-1β和IL-8的表达水平.结果:溃疡性结肠炎组织和TNF-α处理后的HT29细胞中miR-21 mRNA水平显著升高,Bcl-2 mRNA水平显著降低.miR-21 inhibitor可显著降低miR-21 mRNA水平,升高Bcl-2 mRNA水平.miR-21mimic可显著降低野生型Bcl-2质粒(Bcl-2 wt)的荧光素酶活性.与HT29组比较,miR-21 inhibitor组中Bcl-2表达显著增加,si-Bcl-2组中Bcl-2表达显著减少.同时,与HT29组比较,miR-21 inhibitor组细胞存活率及PCNA、Ki67的表达水平显著上升,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9的表达水平显著降低,si-Bcl-2组细胞存活率及PCNA、Ki67的表达水平显著下降,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9的表达水平显著上升.与miR-21 inhibitor组比较,si-Bcl-2+miR-21 inhibitor组细胞存活率及PCNA、Ki67的表达水平显著下降,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9的表达水平显著上升.此外,与HT29组比较,miR-21 inhibitor组中IL-6、IL-1β和IL-8的浓度显著降低,si-Bcl-2组中IL-6、IL-1β和IL-8的浓度显著升高.与miR-21 inhibitor组比较,si-Bcl-2+miR-21 inhibitor组中IL-6、IL-1β和IL-8的浓度显著升高.结论:miR-21通过靶向下调Bcl-2促进肠道上皮HT29细胞的凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏思忱	沧州市中心医院消化内二科	21	144	6.0	11.0
2	孔郁	沧州市中心医院消化内二科	5	6	2.0	2.0
3	魏新亮	沧州市中心医院消化内二科	8	19	4.0	4.0
4	石亮	沧州市中心医院普外窥镜室	7	40	3.0	6.0
5	王卫卫	沧州市中心医院消化内二科	5	7	2.0	2.0
6	邢文韬	沧州市中心医院消化内一科	3	3	1.0	1.0
7	高巧营	南开医院急腹症研究所	1	0	0.0	0.0