嗜吞噬无形体Msp2蛋白与宿主互作靶蛋白筛选及生物信息分析

• 作者: 张丽娟 张辉 王勇 郑炜 陈创夫 马忠臣
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜吞噬无形体 Msp2 酵母双杂交 THP-1 生物信息分析
• 年，卷（期）: 2019,（14）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2657-2661
• 页数: 5页
• 分类号: R33
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2019.14.011

摘要

目的:筛选与嗜吞噬无形体Msp2蛋白互作的THP-1细胞靶蛋白,有助于理解病原体侵袭宿主的分子机理.方法:PCR获得无形体msp2基因克隆到pGBKT7载体上构建诱饵质粒并转化酵母菌株Y2HGold,营养缺陷培养基及蓝白斑实验验证诱饵质粒是否有自激活、毒性;抽提THP-1总RNA,经反转录、Long-distance PCR、同源重组等构建到pGADT7-Rec载体上并转化酵母菌株Y187,鉴定cDNA文库质量;酵母双杂交筛选与无形体Msp2互作的宿主细胞靶蛋白,生物信息学分析蛋白互作可能导致的信号通路变化.结果:成功构建诱饵质粒;cDNA文库容量达4×106克隆,插入片段大小100-3000 bp,且无污染;酵母双杂交获得宿主靶蛋白7个,分别是NADH脱氢酶(泛醌)1 α亚体13(NDUFA13)、锌指蛋白36,C3H样2(ZFP36L2)、核糖体蛋白11(RPL11)、前胸腺素α(PTMA)、C19orf10、组织蛋白酶G(CTSG)、核糖体蛋白S25(RPS25);生物信息学分析,互作的宿主靶蛋白主要参与细胞增殖、细胞凋亡、溶酶体成熟及其它一些信号通路等生物学过程.结论:应用酵母双杂交系统初步筛选出与嗜吞噬细胞无形体表面蛋白Msp2互作的宿主细胞靶蛋白,并利用生物信息学初步分析了其参与的生物学过程,为进一步研究病原菌胞内生存分子机制奠定了基础.