去甲基化酶ALKBH5高、低表达食管鳞癌细胞株的构建

• 作者: 别亚男 方婷晓 林桃燕 翟坚学 肖东 蔡开灿
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 去甲基化酶 去甲基化酶ALKBH5 细胞株构建 RNA甲基化修饰 N6-甲基腺苷化修饰 食管鳞状细胞癌细胞
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 37-40
• 页数: 4页
• 分类号: R735.1
• 字数: 3466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2019.12.010

摘要

目的 构建高、低表达去甲基化酶ALKBH5的食管鳞癌(ESCC)细胞株.方法 将生长状态良好的人源胚胎肾细胞293T于培养瓶内培养,分别记为A、B、a、b、c组,待细胞融合80％～90％后进行质粒转染,A组293T细胞转染高表达ALKBH5的质粒pLV-ALKBH5,B组293T细胞转染对照质粒pLY-con,上述2个质粒中均带有GFP蛋白和Flag标签蛋白(用于后续感染细胞的筛选);a组293T细胞转染低表达ALKBH5的质粒pLKO-shALKBHS-1,b组293T细胞转染低表达ALKBH5的质粒pLKO-shALKBH5-2,c组293T细胞转染对照质粒pLKO-shSCR,上述3个质粒中均带有嘌呤霉素抗性(用于后续感染细胞的筛选).上述各组293T细胞质粒转染72 h后,分别收集细胞上清液,离心后分装;用A、B组细胞上清液分别感染ESCC细胞株(Eca109细胞和Kyse510细胞),采用流式细胞术筛选GFP蛋白(+)的细胞待测;用a、b、c组细胞上清液分别感染ESCC细胞株(Eca109细胞和TE-13细胞),用嘌呤霉素筛选细胞待测.采用qRT-PCR法和Western blotting法分别检测感染高、低表达ALKBH5上清液的ESCC细胞中ALKBH5 mRNA和蛋白.结果 感染A组细胞上清液的Eca109细胞、Kyse510细胞中ALKBH5 mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于感染B组细胞上清液的Eca109细胞、Kyse510细胞(P均＜0.05),感染a、b组细胞上清液的Eca109细胞、TE-13细胞中ALKBH5 mRNA和蛋白的相对表达量均显著低于感染c组细胞上清液的Eca109细胞、TE-13细胞(P均＜0.05).结论 成功构建高、低表达ALKBH5的ESCC细胞株,为进一步探讨ALKBH5在ESCC发生发展中的作用提供了细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡开灿		61	343	10.0	15.0
2	肖东	南方医科大学肿瘤研究所	29	117	5.0	10.0
3	方婷晓		1	0	0.0	0.0
4	翟坚学		1	0	0.0	0.0
5	林桃燕	南方医科大学肿瘤研究所	1	0	0.0	0.0
6	别亚男		1	0	0.0	0.0