摘要:
目的 观察何首乌不同萃取部位(氯仿部位、乙酸乙酯部位、剩余水相部位)对斑马鱼幼鱼的肝脏毒性,并探讨其作用机制.方法 称取1 000 g生何首乌,制备何首乌氯仿部位、乙酸乙酯部位及剩余水相部位固体提取物,采用24h急性毒性实验测算何首乌不同萃取部位对斑马鱼幼鱼的10%致死剂量,据此确定后续实验中何首乌不同萃取部位的给药剂量,其中氯仿部位的低、中、高给药剂量分别为3、6、9 μg/mL,乙酸乙酯部位的低、中、高给药剂量分别为10、20、30 μg/mL,剩余水相部位的低、中、高给药剂量分别为20、40、60 μg/mL.将斑马鱼幼鱼分为a、b、c、d组,a组加入高剂量氯仿部位提取物,b组加入高剂量乙酸乙酯部位提取物,c组加入高剂量剩余水相部位提取物,d组加入等量培养水;各组培养24h后,显微镜下观察各组斑马鱼幼鱼肝脏病理学变化,测算肝体比、卵黄囊占比.将斑马鱼幼鱼分为A1、A2、A3、A4、B1、1β2、B3、B4、C1、C2、C3、C4组,其中A1、A2、A3组分别加入低、中、高剂量氯仿部位提取物,B1、B2、B3组分别加入低、中、高剂量乙酸乙酯部位提取物,C1、C2、C3组分别加入低、中、高剂量剩余水相部位提取物,A4、B4、C4组加入等量培养水;各组培养24h后,采用赖氏法检测各组斑马鱼幼鱼ALT、AST,羟胺法检测各组斑马鱼幼鱼T-SOD.结果 c、d组斑马鱼幼鱼肝脏透明,轮廓明显,形态完整,a、b组斑马鱼幼鱼肝脏变为暗灰色,透明度降低,肝脏变大;a、b、c、d组斑马鱼幼鱼肝体比分别为9.631%±0.011%、10.061%±0.014%、8.235%±0.010%、7.785%±0.013%,a、b组与d组相比,P均<0.05;a、b、c、d组斑马鱼幼鱼卵黄囊占比分别为3.679%±1.131%、3.648%±1.388%、3.862%±1.345%、3.893%±0.601%,组间相比,P均>0.05;与d组相比,a、b组肝细胞数量减少,并出现空泡变性及排列不规则现象,显示出肝损伤.A1、A2、A3组ALT水平均显著高于A4组(P均<0.05),B1、β2、B3组ALT水平均显著高于β4组(P均<0.05),C2、C3组ALT水平均显著高于C4组(P均<0.05);A3组AST水平显著高于A4组(P<0.05),B3组AST水平显著高于B4组(P<0.05);A3组T-SOD水平显著高于A4组(P<0.05),B1、B2、B3组T-SOD水平均显著高于B4组(P均<0.05).结论 何首乌氯仿部位和乙酸乙酯部位对斑马鱼幼鱼具有肝脏毒性,其作用机制可能是何首乌中的毒性成分通过破坏斑马鱼幼鱼肝细胞的氧化应激平衡,进而导致肝细胞损伤.