荣昌猪BMP15基因通过TGF-β R Ⅱ激活SMAD4信号分子机制研究

• 作者: 刘骁 吴昕炜 崔燕 易华山 朱丹 朱飘 赵瑶 邓博远 马鲜平
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 荣昌猪 BMP15 SMAD 卵母细胞 TGF-β
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 754-762
• 页数: 9页
• 分类号: S828.8
• 字数: 6165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.04.011

摘要

本研究旨在阐明荣昌猪BMP15基因在荣昌猪性成熟前不同发育期的表达特性及其与SMADs信号相关基因的表达关系.采集1月龄、3月龄及5月龄荣昌猪卵巢组织,利用qRT-PCR及石蜡切片免疫荧光染色法分析荣昌猪不同月龄卵巢组织内B MP 15基因表达及细胞定位特征;利用5月龄卵巢活组织添加重组人BMP15蛋白及TGF-β受体抑制剂(LY215799和LY2109761),应用qRT-PCR及Western blot方法分析BMP 15及SMADs信号通路相关基因SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD7、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGFβ R Ⅰ和TGF-β R Ⅱ表达特征及BMP15/SMADs信号通路.结果 表明:从1月龄至5月龄,随着荣昌猪生长发育,卵巢组织内BMP15基因mRNA表达量呈上调表达(P＜0.05);石蜡切片免疫荧光试验表明,5月龄卵巢组织卵母细胞周围颗粒细胞内存在BMP15蛋白荧光信号;从3月龄至5月龄的卵巢组织内BMP15、SMAD4、TGF β1及TGFβRⅡ基因在mRNA水平呈上调表达(P＜0.05),而SMAD2、TGF-β2及TGF-βR Ⅰ呈下调表达(P＜0.05);通过5月龄卵巢活组织添加重组人BMP15蛋白、TGF-βR Ⅰ/Ⅱ及TGF-βRⅠ受体抑制剂培养,发现TGF-β R Ⅰ/Ⅱ抑制剂(LY2109761)明显抑制TGF-β R Ⅱ受体蛋白的表达,TGF-β R Ⅰ抑制剂(LY2157299)不能抑制TGF-β R Ⅱ受体蛋白的表达.上述结果表明,荣昌猪BMP15基因在荣昌猪性成熟前的卵巢组织内呈上调表达,SMAD4、TGF-β1及TGF-βRⅡ也呈上调表达.本试验研究表明BMP15基因通过TGF-β R Ⅱ介导SMAD4信号分子调控下游基因的表达,为进一步研究荣昌猪BMP15基因在卵泡发育中发挥的作用提供理论依据.