马流产沙门氏菌的分离鉴定及其微量凝集抗体检测方法的建立与应用

• 作者: 刘荻萩 初晓雨 王宁 王晓钧 王金慧 胡哲 赵语婷 郭奎 郭巍
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 马流产沙门氏菌 分离鉴定 微量凝集 应用 马
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 2112-2121
• 页数: 10页
• 字数: 8486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2020.10.017

摘要

[目的]对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测.[方法]利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进行细菌分离,对紫色菌落进行革兰氏染色鉴定;提取细菌全基因组,利用16S rRNA进行PCR扩增和测序鉴定,并对菌株进行生化鉴定和血清型鉴定,对病因进行综合诊断.利用分离获得的阳性菌株进行灭活后作为凝集抗原,以马流产沙门氏菌标准阳性血清作为阳性对照,通过反应条件优化,建立微量凝集试验方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了验证.与国家行业标准中的试管凝集试验方法进行对比,同时利用微量凝集对华北和西北各3个地方的共151份血清样品进行检测,并随机选取30份样品,利用微量凝集和试管凝集进行检测,并对两种方法检测的敏感性进行比较分析.[结果]各流产马驹组织在沙门氏菌显色培养基上划线结果,均可以获得大量紫色目标菌落;革兰氏染色结果表明,分离的菌株为革兰氏阴性短杆菌,16S rRNA测序证实分离株为沙门氏菌属,生化鉴定结果表明,分离的17株菌均符合马流产沙门氏菌的生化特性,但相比上世纪强毒株马流产沙门氏菌C77-1,均不能发酵鼠李糖;血清型鉴定证实分离株均为马流产沙门氏菌,将分离的17株马流产沙门氏菌分别命名为E.S-1—17.因此证实马匹流产均为马流产沙门氏菌感染所致.利用甲醛对E.S-1菌株进行了灭活处理,成功制备了马流产沙门氏菌凝集抗原,并建立了一种快速敏感的微量凝集检测方法,其中优化了最佳反应凝集抗原浓度为4亿/mL.其敏感性比试管凝集高1个滴度,其特异性与其他常见马传染病病原阳性血清无交叉反应,并且具有良好的重复性.利用微量凝集方法,对华北3个疫情区进行检测,阳性率分别为28.6％、42.9％和27.3％,西北3个无疫情区阳性率均为0％.此外,利用两种方法对相同的30份临床血清进行检测,微量凝集和试管凝集方法阳性份数分别为10份和3份,阳性率分别为33.3％和10％.与试管凝集相比,微量凝集诊断敏感性为100％,诊断特异性为74.1％,总体符合率为76.7％.[结论]分离鉴定获得了17株马流产沙门氏菌,建立了马流产沙门氏菌微量凝集抗体检测方法,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,简便、快速、高通量,可以广泛应用于马属动物中马流产沙门氏菌抗体的检测,是该病诊断及疫苗评估的重要依据之一.