新型CRM1靶向抑制剂的筛选及其对结外NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖的作用

• 作者: 冷楠 刘美铄 杨永亮 王海娜 龙飞达
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 染色体区域维持因子1 抑制剂 计算机辅助药物设计 结外NK/T细胞淋巴瘤 细胞核输出 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 44-51
• 页数: 8页
• 分类号: R965
• 字数: 4393字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11665/j.issn.1000-5048.20200108

摘要

利用计算机辅助药物设计,筛选新型染色体区域维持因子(CRM1)共价靶向抑制剂,并探究其对结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTL)细胞增殖的影响.利用基于片段的药物设计方法在LFS-01母核结构的基础上设计新型CRM1抑制剂并利用ADME/T、共价对接等手段进行药物筛选得到小分子化合物LFS-829.MALDI-TOF质谱分析表明,LFS-829对CRM1具有靶向作用.用CCK-8法检测LFS-829对ENKTL细胞系SNK6及HANK-1增殖活性的影响,活细胞工作站观察药物作用下细胞形态的变化.利用免疫荧光技术分析LFS-829对CRM1核输出功能的影响.通过蛋白质免疫印迹实验、双荧光素酶报告基因实验以及酶联免疫吸附技术分析不同浓度的LFS-829作用下NF-κB信号通路的变化.借助流式细胞仪分析检测细胞凋亡,并通过蛋白质免疫印迹实验检测凋亡通路相关蛋白的表达.根据外周血单核淋巴细胞(PBMC)毒性测试、血小板毒性测试以及小鼠急性毒性实验对LFS-829进行安全性评价.结果表明,LFS-829能够与CRM1蛋白疏水活性口袋的半胱氨酸残基共价靶向结合,并选择性杀伤SNK6及HANK-1细胞,72 h的IC50分别为366和158 nmol/L.800 nmol/L LFS-829能够显著抑制CRM1的细胞核输出功能,促使IκB-α的细胞核聚集,下调NF-κB信号通路的转录活性,并显著上调凋亡通路蛋白p53、剪切型Caspase 3和剪切型Caspase 9的表达,诱导细胞凋亡.LFS-829对PBMC以及血小板没有明显的杀伤效果.在300 mg/kg的大剂量作用下,LFS-829未对小鼠造成实质性的组织损伤,安全性良好,具有良好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冷楠	大连理工大学生物工程学院分子药物中心	5	10	2.0	3.0
2	杨永亮	大连理工大学生物工程学院分子药物中心	3	1	1.0	1.0
3	刘美铄	大连理工大学生物工程学院分子药物中心	1	0	0.0	0.0
4	王海娜	大连理工大学生物工程学院分子药物中心	1	0	0.0	0.0
5	龙飞达	大连理工大学生物工程学院分子药物中心	1	0	0.0	0.0