改良的Trizol法提取小鼠皮肤RNA技术

• 作者: 刘先国 周利君 唐源 张辉 揭英桃 林震嘉 熊媖 谈智
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA提取 小鼠皮肤 Trizol 银屑病
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 224-232
• 页数: 9页
• 分类号: Q5-3
• 字数: 5160字
• 语种: 中文

摘要

[目的]由于皮肤组织韧性强且存在大量RNA酶,采用经典Trizol法提取的RNA存在易降解质量低等不足.因此,本研究旨在通过改良的Trizol法实现高质量的皮肤RNA提取.[方法]采用不同处理方式(Tri:Trizol包埋;Pro:RNA样本保护液包埋;Cry:先冷冻液氮再冷冻-80℃冰箱;LNG:液氮研磨;Cut:采用剪刀剪碎组织)提取的小鼠正常皮肤RNA为实验组;脊髓组织作为参照组,并以咪喹莫特(IMQ)诱导的小鼠银屑病模型皮肤组织作为保真性验证组.我们采用紫外分光光度法、琼脂凝胶电泳法、定量逆转录PCR法(qRT-PCR)等方法来检测经典Trizol法(1-Tri,Nor)和改良Trizol法(2-Tri,LNG-Tri,Tri-Cut,Pro)提取的RNA浓度、纯度和完整性以及IL-1βmRNA表达的差异性情况.[结果]①与脊髓组织相比,经典Trizol法(1-Tri)获得的正常皮肤组织总RNA量要低,DNA污染和5S RNA条带明显,IL-1βmRNA相对表达偏高,说明经典Trizol法在皮肤组织中提取RNA存在局限性,需要进行改良.②在不同小鼠皮肤样本处理组中,改良的2-Tri法和LNG-Tri法获得的RNA浓度更高,同时RNA降解、DNA污染更低,IL-1βmRNA表达更接近正常水平.更重要的是,在小鼠银屑病模型中,2-Tri法提取的RNA样本能真实反映出正常皮肤与银屑病变皮肤之间IL-1βmRNA的变化趋势.[结论]改良的2-Tri或LNG-Tri法分离的总RNA质量好,能可靠地反映生理或病理条件下的mRNA表达模式.