Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

• 作者: 吴凯朝 吴建明 李杨瑞 杨丽涛 黄诚梅
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: RNA Trizol试剂法 改良Trizol-异丙醇法 甘蔗 水稻 玉米
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 1934-1939
• 页数: 6页
• 分类号: Q781
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2012.12.1934

摘要

[目的]建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法,为进行后续的分子生物学研究奠定基础.[方法]采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化.[结果]与吸取0.4 mL上清液相比,吸取0.2 mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值分别在1.95～2.00和2.11～2.44,所获得的总RNA纯度较高.沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11～2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01～1.61),总RNA纯度较高.经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA 28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好;LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低.以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153bp.[结论]改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA.