mCTAB-dLiCl法高效提取花生各组织部位RNA及其验证

• 作者: 刘俊仙 唐秀梅 李忠 熊发前 王丛丛 蒋菁 贺梁琼 钟瑞春 韩柱强
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 花生 RNA提取 mCTAB-dLiCl法 组织部位
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 1781-1784
• 页数: 4页
• 分类号: S565.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2013.11.1781

摘要

[目的]探讨花生不同组织部位RNA提取方法,为开展花生分子生物学研究奠定基础.[方法]在CTAB法的基础上,设计一种改良的mCTAB-dLiC1法,其使用高质量体积分数的KAC除去组织中的多糖,使用两次10.0 mol/L的LiC1沉淀RNA,采用琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量,核酸蛋白分析仪测定RNA纯度,并通过逆转录、RT-PCR和cDNA-SCoT验证其质量.[结果]采用mCTAB-dLiC1法的RNA产率为554.80 μg/g,RNA的A260/A280比率为1.89,RNA非变性琼脂糖凝胶电泳未出现可见的DNA条带;扩增的28S和18S条带比值为2∶1,且条带清晰无拖尾现象;提取的RNA通过逆转录、RT-PCR扩增和cDNA-SCoT扩增验证,均获得较好的扩增效果,获得的RNA和cDNA质量好.[结论]mCTAB-dLiCl RNA提取方法是一种高效提取花生各组织部位RNA的方法,可在花生分子生物学研究中应用.