白藜芦醇通过靶向SIRT1激活Keap1-Nrf2-HO-1途径发挥对草酸钙肾结石形成的调控作用

• 作者: 南锡浩 吴影 宋静 张智慧 王志龙 田河 邸彦橙 郭振海 高强
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白藜芦醇 ROS Keap1/Nrf2/HO-1通路
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 77-83
• 页数: 7页
• 分类号: R-33
• 字数: 4014字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2020.02.012

摘要

目的 探究白藜芦醇靶向SIRT1(沉默信息调节因子)激活Keap1-Nrf2-HO-1途径对草酸钙结石形成的调控作用.方法 本实验通过CCK8方法筛选出白藜芦醇(RSV)对于人肾上皮细胞(HK-2)的最佳药物剂量.随后将HK-2随机分为4组,对照组、草酸组、草酸+RSV(resveratrol)、草酸+RSV+EX527组.通过CCK8方法研究各处理组的细胞活力.流式细胞仪检测各实验组的ROS产生水平.通过Western blot、PCR实验探究Sirt1、Keap1、Nrf2、HO-1、TGF-β1及Smad2表达.通过构建HK-2-siRNA,再次检测上述指标.结果 药物毒性筛选结果表明500 nM为实验最佳药物剂量.CCK8提示RSV缓解了草酸对于HK-2的损伤.sirt1抑制剂(EX527)逆转RSV的保护性效果.活性氧水平结果表明,RSV能够降低草酸钠诱导的活性氧产生,EX527能够阻断RSV的效应.Western blot结果表明,与草酸钠组相比,RSV应用后,sirt1表达上调,Keap1、Nrf2、HO-1表达上调(P<0.01),Smad2表达下调(P<0.01).然而应用EX527后,sirt1上调的相关蛋白表达下降.qPCR结果表明,与草酸钠组相比,应用RSV后TGF-β1(P<0.01),Smad2(P<0.05)、Smad3(P<0.05)、Smad4(P<0.01)mRNA表达下调(P<0.01),而sirt1 mRNA表达上调(P<0.01).应用EX527可以逆转以上效应.Western blot结果表明,与草酸钠组相比,siRNA干扰后,sirt1表达下调,Keap1、Nrf2、HO-1表达下调.沉默sirt1表达后,随后应用RSV,发现RSV并不能抑制Smad2的激活.结论 本研究表明白藜芦醇对于HK-2细胞具有抗氧化作用,其机制可能是sirt1激活后,促进了Keap1、Nrf2、HO-1的表达,并进一步抑制了TGF-β1产生水平,从而抑制了ROS的产生.