表达EGFP重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建与鉴定

• 作者: 于雪 刘磊 唐娜 孙培姣 张松林 杨慧 沈志强 肖跃强
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染性克隆 ORF6转录调控序列 EGFP 噬斑纯化
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 39-46
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4227字
• 语种: 中文

摘要

RT-PCR获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XZ06a株基因组,在基因组5'末端、3'末端分别添加锤头样核酶、丁型肝炎病毒核酶序列,并插入改造的pCAGEN表达载体中,构建DNA-launched感染性克隆,然后在病毒基因组ORF1b与ORF2间引入ORF6 TRS序列、酶切位点及EGFP基因,转染Marc-145细胞拯救表达EGFP的重组病毒并噬斑克隆纯化,Western blot检测EGFP表达并对获得的表达EGFP的重组病毒进行TCID50测定与分析.结果显示:PRRSV基因组大小为15145 nt,转染后5～7 d即可观察到重组病毒所致特异性病变灶,经过噬斑纯化,能够观察到携带EGFP基因的重组病毒在对应病变灶均有绿色荧光,最终获得稳定表达EGFP的重组病毒,且重组病毒感染16 h时即可检测EGFP表达;与亲本病毒相比,表达EGFP重组病毒致细胞出现病变时间有所延长,增殖滴度有所降低.本研究成功构建了表达EGFP的重组PRRSV,为开展PRRSV病毒复制机制、感染特性、致病机制、疫苗开发等研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖跃强		38	129	7.0	9.0
2	沈志强		525	1950	18.0	25.0
6	唐娜		34	209	8.0	13.0
7	杨慧		16	66	5.0	7.0
8	张松林		21	69	5.0	7.0
9	于雪		6	8	1.0	2.0
10	刘磊		5	1	1.0	1.0
11	孙培姣		3	0	0.0	0.0