猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的构建

• 作者: 施开创 李焕荣 杨汉春 查振林 盖新娜 郭鑫 陈艳红
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: PRRSV PCV2 实时荧光定量PCR 重组质粒 标准曲线
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 10-12
• 页数: 3页
• 分类号: S858.285.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-6005.2007.04.003

摘要

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7和猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR/PCR扩增,分别扩增出大小为308 bp和417 bp的部分基因片段.用T4连接酶将目的片段与pGEM-Teasy载体系统连接,并转化到大肠杆菌DH-5α株感受态细胞.提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为PRRSV和PCV2的阳性重组质粒.将重组标准质粒10倍系列稀释后作为模板,通过实时荧光定量PCR方法(Real-time PCR),建立了PRRSV、PCV2的标准曲线及其直线回归方程,并确定其最佳读板温度.该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点,为分析PRRSV和PCV2共感染猪体内病毒的绝对含量提供了必要的技术平台.